石蜡切片

石蜡切片技术的原理是基于石蜡的特性，将组织包埋在石蜡中，然后通过切片机将组织切成薄片，再进行染色和封片，最后制成显微镜下观察的样本。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。

MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。 它们仅供参考。

1. 用 4% PFA 或其他固定剂固定组织;固定体积应为组织体积的 5-10 倍。

2. 将固定组织切成适当的部分并放入包埋盒中。

3. 石蜡包埋的脱水 (水制石蜡)：

3.1 70% 乙醇，每 1 小时更换乙醇，共两次。

3.2 80% 乙醇，每 1 小时更换乙醇，共两次。

3.3 95% 乙醇，每 1 小时更换乙醇，共两次。

3.4 100% 乙醇，每 1 小时更换乙醇，共三次。

3.5 二甲苯或替代品 (即 Clear Rite 3)，每 1 小时更换一次，共三次。

3.6 石蜡 (56-58ºC)，每 1.5 小时更换一次，共 2 次。

3.7 将组织嵌入石蜡块中。

4. 切割和安装样品

4.1 将石蜡块修剪到最佳切割表面，包括带有小石蜡框架的样品。

4.2 切片 3-10 μm (常用 5 μm)；用刷子将部分移到刀架上。

4.3 用第二把湿刷将石蜡丝带或切片放入 40-45ºC 水浴中 (它会膨胀，皱纹会消失)。

4.4 使用载玻片和刷子将游泳石蜡部分捞出，以定位该部分。

4.5 37ºC 下干燥部分 O/N (较低的烘烤温度更有利于后续抗体检测)。

5. 后续方法的再水化 (水制石蜡)：

5.1 每 3-10 分钟更换一次二甲苯，共更换 2 次 (切片 >25 μm为 3+ 次更换) [脱蜡]。

5.2 100% 乙醇每 3 分钟更换一次，共 2 次 [再水合]。

5.3 95% 乙醇每 3 分钟更换一次，共 2 次 [再水合]。

5.4 用蒸馏水冲洗。

1. 组织离体后，必须在 1 小时内固定。

2. 如发现固定液变质，如甲醛液体产生白色沉淀，应立即更换。

3. 固定时间不超过 40 小时，根据室温和标本不同而调整。

4. 脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。

5. 在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。

6. 脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象。

7. 用于正常组织化学分析的样品可以在 45-60ºC 下更快地干燥 6h-O/N。请勿在 >50ºC 下烘烤 >25 μm 切片，否则可能会出现裂缝，并且部分样品可能会在以后的洗涤过程中脱落。

8. 不同方案之间的补液系列差异很大。一些实验室使用 95% 1 min、80% 1 min 甚至更低的乙醇溶液。