巴斯德毕赤酵母培养

巴斯德毕赤酵母是甲醇营养型酵母中的一类能够利用甲醇作为唯一碳源和能源的酵母菌。与其它酵母一样，在无性生长期主要以单倍体形式存在，当环境营养限制时，常诱导 2 个生理类型不同的接合型单倍体细胞交配，融合成双倍体。

MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。 它们仅供参考。

1 在含有所需抗生素的琼脂平板上培养毕赤酵母细胞 (非振荡，30℃, 72 h)。

• 第一天

2 栽培。

2.1 将生长培养基 (BMGY) 添加至挡板烧瓶中。

2.2 单阳性菌落接种生长培养基。

2.3 30℃、225 rpm 孵育过夜。

• 第二天

3 基因表达。

3.1 将培养物转移至无菌 50 mL 离心管中。

3.2 离心并倒出上清液。

3.3 将 10 mL 无菌 BMMY 添加至用过的挡板烧瓶中。旋转并转移至相应的离心管。

3.4 涡旋离心管。

3.5 2000 x g 离心 5 min。

3.6 倒出上清液，加入 10 mL 新鲜 BMMY。

3.7 涡旋溶液并转移至原烧瓶中。

3.8 225 rpm 孵育过夜 (30℃, 24 h)。

• 第三天

4 继续表达。

4.1 向烧瓶中加入 50 µL 无菌 100% 甲醇。

4.2 30°C、225 rpm 孵育过夜。

• 第四天

5 细胞收获。

5.1 从第二天起将细胞转移至 50 mL 离心管中，并在 2000 x g 离心 5 分钟。

5.2 倒出上清液并将含有细胞壁的沉淀重悬于 1 mL 水中。

5.3 转移至预先称重的 2 mL 管中。

5.4 在 10000 x g 离心 2 分钟，倒出水并使用细胞进行所需实验。

• 备选方案

对于添加培养基的每个步骤，仅添加 3 mL，而不是 10 mL。所有离心步骤均在 3.000 x g (而不是 2.000 x g) 下进行，并且仅添加 20 μL 无菌 100% 甲醇进行甲醇诱导。

以类似程序培养起始体积为 3 mL 的液体培养物。

将收获的细胞储存在 -20℃。

操作过程中，应该注意实验材料的无菌操作，使用优质的试剂和耗材，避免对实验结果产生影响。