DNA 凝胶电泳

立式电泳槽，玻璃板，制胶架，移液器，凝胶成像仪

凝胶电泳是一种分离生物大分子 (如核酸或蛋白质) 的方法，它迫使它们在电场下通过凝胶基质。由于与氨基酸侧链相关的电荷不同，PAGE 可用于根据净电荷和大小来分离完整的蛋白质。带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。核酸电泳通常在琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中进行，浓度不同的琼脂糖和聚丙烯酰胺可形成分子筛网孔大小不同的凝胶，可用于分离不同分子量的核酸片段。

MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。 它们仅供参考。

1. 彻底清洁玻璃板和垫片。握住玻板的边缘或戴上手套，以免手上的油沉积在玻板的工作表面。用去离子水和乙醇冲洗玻板，放在一边晾干。

2. 将玻璃板与垫片组装在制胶架中。

3. 根据下表，用所需的聚丙烯酰胺百分比制备凝胶溶液，其中给出了制造 12 ml 所需的每种成分的量:

4. 加入 TEMED 后快速工作，在丙烯酰胺聚合之前用 5 ml 移液器将丙烯酰胺溶液加入玻板间。

5. 立即将合适的梳子插入凝胶中，注意不要让气泡困在梳齿下面。梳齿的顶部应该略高于玻璃的顶部。如有必要，使用剩余的丙烯酰胺凝胶溶液完全填充凝胶模具。确保没有丙烯酰胺溶液从凝胶模具中泄漏。

6. 让丙烯酰胺在室温下聚合 30-60 分钟。

7. 聚合完成后，用浸过 1 倍 TBE 的纸巾包裹梳子和凝胶顶部。然后将整个凝胶密封在保鲜膜或塑料袋中，保存在 4°C，直到需要使用。

8. 当准备好进行电泳时，从凝胶轮中取出凝胶，仔细清洁白色板背面溢出的凝胶，并将凝胶插入凝胶盒中。加入流动缓冲液，小心地将梳子从聚合凝胶中拔出。

9. 使用注射器用 1x TBE 再次冲洗孔。将 DNA 样品与 6X 上样缓冲液混合，将混合物装入孔中。

10. 将电极连接到电源组，打开电源，然后开始电泳运行。

11. 运行凝胶，直到标记染料已迁移所需的距离。关闭电源，断开引线，将电泳缓冲液从贮液池中弃去。

12. 把玻璃板拆下来。把玻璃板放在桌上。用垫片或塑料楔子将上玻璃板的一角抬起。检查凝胶是否附着在下面的板上。将上板平稳地拉开。拆下垫片。

13. 用 SYBR Green (用 TBE 按 3:10,000 或 4:10,000 的比例稀释) 染色，然后展示在凝胶成像仪上。

1. 玻璃板必须无油点，以防止在凝胶中形成气泡。

2. 在电泳槽和凝胶中使用相同批次的电泳缓冲液是很重要的。离子强度或 pH 值的微小差异会产生缓冲前缘，从而极大地扭曲 DNA 的迁移。

3. 不要试图从加样装置中排出所有的样品，因为这几乎总是会产生气泡，将样品吹出孔外。重要的是不要花太长时间来完成凝胶的加载，否则，样品将从孔中扩散出来。

4 非变性聚丙烯酰胺凝胶通常在 1v /cm 和 8v /cm 之间运行。如果电泳在较高的电压下进行，凝胶中心的差异加热可能导致 DNA 带弯曲，甚至小 DNA 片段链融化。