mmu-let-7j mimic  (Synonyms: mmu-let-7j 模拟物)

mmu-let-7j mimics are small, chemically synthesized double-stranded RNAs that mimic endogenous miRNAs and enable miRNA functional analysis by up-regulation of miRNA activity.

1. miRNA的配制

1.1 miRNA产品呈透明或半透明的干膜状附着在管壁上，使用前将试管瞬时离心，以确保 miRNA 位于试管底部。使用不含核酸酶的水重新配制 miRNA，得到20 μM的母液。

对于5 nmol miRNA：加入250 μL 无核酸酶水，涡旋振荡数次溶解。

对于20 nmol miRNA：加入1000 μL 无核酸酶水，涡旋振荡数次溶解。

1.2 (可选) 将 miRNA 分装到一个或多个管子中以减少冻融的次数（<5）。

1.3 将配制好的母液在-20℃或-80℃条件下保存。

2. 准备细胞

2.1 预先接种细胞，待达到合适的细胞密度时进行细胞转染。转染前细胞活力影响转染结果。

3. 转染

3.1 制备转染混合物A和B

注：对于 miRNA mimics，我们推荐的工作浓度为 50nM。miRNA 产品最佳工作浓度因不同的细胞类型及研究目的而异，这取决于miRNA、细胞系和选择的分析方法。为了确定最佳结果的浓度，应该使用不同的浓度进行优化实验。优化后的浓度范围为 10~200nM。

6孔板的每孔：A: 245 μL无血清培养基+ 5 μL miRNA；B: 240 μL无血清培养基+ 10 μL HY-K2017 siRNA/miRNA Transfection Reagent

12孔板的每孔：A: 97.5 μL无血清培养基+ 2.5 μL miRNA；B: 95 μL无血清培养基+ 5 μL HY-K2017 siRNA/miRNA Transfection Reagent

24孔板的每孔：A: 48.75 μL无血清培养基+ 1.25 μL miRNA；B: 47.5 μL无血清培养基+ 2.5 μL HY-K2017 siRNA/miRNA Transfection Reagent

96孔板的每孔：A: 24.75 μL无血清培养基+ 0.25 μL miRNA；B: 24.5 μL无血清培养基+ 0.5 μL HY-K2017 siRNA/miRNA Transfection Reagent

如果使用其他品牌的转染试剂，需要根据具体情况调整转染试剂加入的量。

3.2 将稀释好的 A 和 B 轻轻混合。室温孵育15-20分钟。

3.3 从细胞中去除培养基，用 PBS 洗涤。

3.4 向细胞中添加 miRNA-转染试剂混合物。

6孔板的每孔：加入1500 μL不含血清的新鲜培养基，然后加入500 μL的转染混合物 (A+B)，混匀。

12孔板的每孔：加入800 μL不含血清的新鲜培养基，然后加入200 μL的转染混合物 (A+B)，混匀。

24孔板的每孔：加入400 μL不含血清的新鲜培养基，然后加入100 μL的转染混合物 (A+B)，混匀。

96孔板的每孔：加入50 μL不含血清的新鲜培养基，然后加入50 μL的转染混合物 (A+B)，混匀。

3.5 在37℃孵育细胞1-3天。然后分析转染细胞。可在转染约 6 小时后将无双抗和血清培养基更换为正常含血清和双抗培养基。

注：转染时的培养基中不要加入抗生素，否则会降低细胞转染的效率，甚至导致细胞死亡。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

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mmu-let-7j

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mmu-let-7j 模拟物

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