AMCA-X SE 

AMCA-X-SE is a coumarin derivative that generates fixed blue fluorescence and an NHS-activated ester that forms stable amide bonds with primary amine groups. It is used as a reactive dye for labeling amino groups of peptides, proteins, and oligonucleotides. Maximum excitation/emission wavelength: 354/442 nm^[1].

原液制备
1. 蛋白准备
为了获得最佳标记效果，请将蛋白 (抗体) 浓度配制为 2 mg/mL。
1) 蛋白溶液PH值应为8.5±0.5，若PH低于8.0，则用1 M 碳酸氢钠进行调整。
2) 若蛋白浓度低于2 mg/mL，标记效率会大大降低，为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。
3) 蛋白必须在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和铵离子的缓冲液中，否则会影响标记效率。
2. 染料准备
将无水二甲基亚砜加入AMCA-X-SE小瓶中，制成10 mM储备溶液，震荡摇匀。
3. 染料用量计算
标记反应所需的 AMCA-X-SE 用量取决于要标记蛋白的用量，AMCA-X-SE 与蛋白的最佳摩尔比为 10 左右。
例：假如所需标记蛋白为 500 μL 2 mg/mL 的 IgG (MW=150，000)，用 100 μL DMSO 溶解一管 1 mg AMCA-X-SE，则所需 AMCA-X-SE 体积为 3 μL，详细计算流程如下：
1) mmol (IgG) = mg/mL (IgG)×mL (IgG) / MW (IgG) =2 mg/mL×0.5 mL / 150，000 mg/mmol= 6.7×10-6 mmol
2) mmol (AMCA-X-SE) = mmol (IgG)×10 =6.7×10-6 mmol×10 = 6.7×10-5 mmol
3) μL (AMCA-X-SE) = mmol (AMCA-X-SE)×MW (AMCA-X-SE) / mg/μL (AMCA-X-SE) = 6.7×10-5 mmol×443 mg/mmol / 0.01 mg/μL = 3 μL (AMCA-X-SE)

使用说明
1. 标记反应
1) 取算好体积的新鲜配制的 10 mg/mL AMCA-X-SE 缓慢加入到 0.5 mL 蛋白样品溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀，防止蛋白样品变性失活。
2) 将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育 60 min，每隔 10-15 min，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合两种反应物，提高标记效率。
2. 蛋白纯化脱盐
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱纯化染料蛋白偶联物为例。
1)按照生产说明书制备 Sephadex G-25 柱。
2)将反应混合物装入 Sephadex G-25 色谱柱顶部。
3)当样品运行到顶部树脂表面下方时，立即加入 PBS (pH 7.2-7.4)。
4)向所需样品中加入更多的 PBS (pH 7.2-7.4)，完成柱纯化。结合含有所需要的染料-蛋白质缀合物的组分。

注意事项
1. AMCA-X-SE 对光及湿度敏感。即用即配 AMCA-X-SE 溶液并丢弃未使用的部分。
2. 低浓度的叠氮化钠 (≤3 mM 或 0.02％) 或硫柳汞 (≤0.02 mM 或 0.01％) 不会显著干扰蛋白标记；但是 20-50％ 的甘油会降低标记效率。
3. 避免使用含伯胺 (例如 Tris，甘氨酸) 或铵离子的缓冲液，它们与待标记蛋白竞争反应。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

443.45

C₂₂H₂₅N₃O₇

216309-02-3

固体

White to off-white

445

350

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

-20°C, protect from light

*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light)

• [1]. Hong H, et al. Surface modification of the polyethyleneimine layer on silicone oxide film via UV radiation. Applied surface science, 2009, 255(12): 6103-6106.