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Anti-Flag Affinity Gel 

Anti-Flag 亲和凝胶

Cat. No.: HY-K0217
Manual SDS 技术支持

MCE Anti-Flag 亲和凝胶用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 Flag (DYKDDDDK) 标签蛋白的免疫沉淀、蛋白纯化实验。

Anti-Flag Affinity Gel

1.  客户无需承担相应的运输费用。

2.  同一机构（单位）同一产品试用装仅限申领一次，同一机构（单位）一年内

     可免费申领三个不同产品的试用装。

3.  试用装只面向终端客户。

规格 价格 是否有货 数量
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1 mL ￥1980 In-stock
5 mL ￥7740 In-stock
10 mL ￥15400 In-stock

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  • 描述及优势

  • 储存条件 & 期限

  • 操作流程

  • 包装

  • 文件资料

描述及优势

MCE Anti-Flag 亲和凝胶是由高质量的鼠源 lgG2b 单克隆抗体与琼脂糖 Sepharose 4B 共价偶联而得，具有较高的 Flag (DYKDDDDK) 标签融合蛋白结合容量 (>1.1 mg 蛋白/mL)，可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 Flag 标签(DYKDDDDK) 蛋白的免疫沉淀 (IP) 实验。

特点：

1. 方便省时

2. 非特异性结合低

3. 样品损失少

4. 载量 > 1.1 mg/mL.

 

本产品的规格与实际凝胶体积一致，凝胶含量为 50%。
储存条件 & 期限

-20°C, 2 年
操作流程

1. 凝胶预处理

1.1 将 Anti-Flag 亲和凝胶重悬混匀，吸取 10 μL 凝胶悬液 (约 5 μL 凝胶) 至干净的 1.5 mL 离心管。

1.2 加入 600 μL 洗涤缓冲液，混合均匀，10,000 rpm 离心 30 秒，弃去上清。重复 3-4 次。

注：小心吸取上清，避免凝胶损失。

2. 样品的结合

2.1 在上述清洗干净的凝胶中加入 500 μL 细胞裂解液。充分混匀后，置于翻转混合仪上孵育，4℃ 孵育 2 小时 (如需提高结合效率，可延长至过夜)。

2.2 10,000 rpm 离心 30 秒，将上清转移至新离心管 (上清液可用于检测 Flag 标签蛋白是否有残留)。

3. 洗涤

在上述分离得到的凝胶中加入 500 μL 洗涤缓冲液，充分混悬凝胶，10,000 rpm 离心 30 秒，弃去上清。重复以上洗涤步骤 3 次以上，直到洗涤后的上清液中 OD280 小于 0.05 为止。

注意：如上清液的 OD280 大于 0.05，适当增加洗涤次数即可。

4. 洗脱

本说明书提供三种 Flag 标签蛋白洗脱方案，操作者可根据需要选择不同的洗脱方案。

4.1 变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。

步骤：在上述洗涤干净的凝胶中加入 50 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer，充分混匀后煮沸 5 分钟。10,000 rpm 离心 30 秒，取 4 μL 上清液进行 SDS-PAGE 检测。

4.2 酸性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。步骤：在上述洗涤干净的凝胶中加入 50 μL 洗脱缓冲液 A，充分混匀后室温孵育 10 分钟。10,000 rpm 离心 30 秒，收集上清。按照每 50 μL 洗脱液加入 25 μL 中和缓冲液的比例加入中和缓冲液，将洗脱产物 pH 调节至中性，样品可用于后期功能分析。

4.3 竞争性洗脱：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。 步骤：在上述洗涤干净的凝胶中加入 30-50 μL 洗脱缓冲液 B。充分混匀后，置于翻转混合仪上孵育，室温孵育 1 小时或 4℃ 孵育 2 小时。10,000 rpm 离心 30 秒，收集上清，即得目的蛋白，样品可用于后期功能分析。
包装
Contents HY-K0217-1 mL HY-K0217-5 mL HY-K0217-10 mL
MCE Anti-Flag Affinity Gel 1 mL 5 mL 10 mL
文件资料
Help & FAQs
  • Do most proteins show cross-species activity?

    Species cross-reactivity must be investigated individually for each product. Many human cytokines will produce a nice response in mouse cell lines, and many mouse proteins will show activity on human cells. Other proteins may have a lower specific activity when used in the opposite species.

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产品名称：
Anti-Flag 亲和凝胶
目录号：
HY-K0217
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