Human CD3/CD28 T Cell Activation Magnetic Beads 

人 CD3/CD28 T 细胞激活磁珠

T 细胞的激活通常需要 TCR/CD3 信号和 CD28 共刺激信号。TCR/CD3 信号通过 T 细胞表面的 T 细胞受体 (TCR) 与抗原递呈细胞上的抗原呈递分子结合，启动初步的激活信号。CD28 共刺激信号通过 T 细胞表面的 CD28 与抗原递呈细胞上的 B7 分子（如 CD80、CD86）结合，提供第二信号，增强 T 细胞的激活、增殖及存活。

MCE 人 CD3/CD28 T 细胞激活磁珠基于 CD3 和 CD28 两种重要的共刺激信号，磁珠表面偶联的 Anti-CD3 和 Anti-CD28 抗体可分别激活 TCR 和 CD28 共刺激信号，无需依赖饲养层细胞（抗原递呈细胞）或抗原即可简单快速地激活 T 细胞。细胞培养过程中可通过添加重组人 IL-2 来刺激 T 细胞扩增。细胞激活或扩增后，可通过磁力架去除磁珠。

本品适用于外周血单核细胞 (PBMC) 或 T 细胞亚群（如 CD3 T 细胞、CD4 T 细胞及 CD8 T 细胞）的 T 细胞激活。

4℃，2 年

磁珠禁止冻结

1. 磁珠准备：充分重悬磁珠（如涡旋 > 30 s 或置于旋转混匀仪 > 5 min）。

2. 清洗磁珠：取 25 μL 磁珠至无菌流式管中，加入 1 mL 洗涤缓冲液，涡旋 5 s 或用移液器吹吸混匀，置于磁性分离器上，磁性分离 3 min 弃上清。换用细胞培养基重复清洗 1 次，用 1 mL 细胞培养基重悬磁珠，此时磁珠浓度为 2.5 × 10⁶ Beads/mL，可满足 96 孔板 10 个孔用量。

注：a. 清洗过程中注意避免产生气泡。

b. 若初始磁珠体积 > 1 mL，则清洗磁珠时洗涤缓冲液体积与磁珠体积一致。

c. 磁珠用量可根据孔板数和细胞量设置。

1. 用培养基调整 T 细胞浓度为 1 × 10⁷ 个/mL，每孔加入 25 μL T 细胞 + 75 μL细胞培养基，细胞量为 2.5 × 10⁵ 个/孔，孔板体积为 100 μL。

注：可根据实验调整接种细胞量，保持培养基体积为 100 μL。

2. 加入 100 μL 清洗过的磁珠，磁珠量为 2.5 × 10⁵ 个，磁珠：细胞 = 1:1，孔板终体积为 200 μL。

注：可根据实验调整磁珠与细胞的比例，推荐比例为 1:1。

3. 将接种细胞与磁珠的孔板置于 37℃、5% CO₂ 培养箱中孵育激活。

注：孵育激活时间可根据实验需要进行调整。

4. 收获激活的 T 细胞用于后续细胞生物学实验。

1. 调整 CD3⁺ T 细胞浓度为 1 × 10⁶ - 1.5 × 10⁶ 个/mL，按照磁珠：细胞 = 1:1 加入适量清洗过的磁珠，置于培养箱中孵育激活。

2. 培养激活 2 天后，在培养集中添加重组人 IL-12，重组人 IL-12终浓度为 30 U/mL。将细胞与磁珠的孔板置于 37℃、5% CO₂ 培养箱中培养刺激 T 细胞扩增。

注：a. 建议每天观察细胞激活与扩增情况，注意细胞的形态与大小。当观察到细胞皱缩或增殖速度明显变慢时，细胞可能耗竭。

b. 建议在细胞激活前 2 天不对细胞进行额外处理。2 天后随时观察细胞状态，当培养基变黄或孔板内细胞数量过多时进行换液或传代。

c. 每次换液或传代后应及时补充重组人 IL-12 至终浓度为 30 U/mL。

3. 定期进行细胞计数，当细胞密度超过 2.5 × 10⁶ 个/mL时，用移液器轻柔吹打混匀细胞并将密度调整为 0.5 × 10⁶ - 1 × 10⁶ 个/mL。

1. 使用商业化 T 细胞培养基进行 T 细胞扩增时，生长因子的浓度可根据实验需求进行调整。

2. 建议选用低吸附移液器吸头和离心管等耗材，避免因吸附造成磁珠和抗体的损耗。

3. 磁珠在使用和保存过程中应避免高速离心、干燥或冻存；磁珠禁止长时间置于磁场，否则会引起磁珠聚团结块，降低其结合活性。

4. 从磁珠保存管中吸取磁珠前应充分振荡混匀，操作过程中动作应轻柔，并避免产生气泡。

5. 本品需要与磁性分离器配套使用。

6. 实验操作过程需轻柔，避免对细胞造成机械损伤。

7. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。