THP-1 细胞分化

巨噬细胞是重要的免疫效应细胞，在固有免疫和适应性免疫应答中发挥重要作用。THP-1 细胞通常用佛波酯 (PMA) 诱导分化为巨噬细胞。

MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。 它们仅供参考。

1. THP-1 单核细胞在 34℃，5% CO₂ 的加湿培养箱中在含链霉素、10% FBS RPMI 培养基中培养。将所需细胞 200 g 室温离心 8 分钟。弃上清，重悬细胞。

2. 取10 μL 细胞混悬液与10 μL 台盼蓝染液混合均匀，计数并评估细胞活力，计算每毫升细胞的浓度。根据 24 孔板 1×10⁶ 个细胞/孔，6 孔板 5×10⁶ 个细胞/孔的密度铺板。

3. PMA 诱导 THP-1 分化的最终浓度为 30 ng/mL，使用 10% FBS RPMI 进行稀释。加入 PMA 后，34℃，5% CO₂ 培养 72 小时。

4. 用 1X PBS 洗涤细胞 3 次以去除残留的 PMA。

5. 更换新鲜的 10% FBS RPMI 培养基，34℃，5% CO₂ 培养 72 小时。

6. 即可用完全分化的 THP-1 巨噬细胞进行实验。

1.培养过程中如果存在细胞碎片，可等待细胞长起来后，通过低速离心去除。

2.细胞发生少量聚团时我们可以等待 THP-1 细胞密度扩大后改善这种情况，但发生严重聚团时我们可以提高血清 (FBS) 用量，或者适度吹散细胞。

3.THP-1 细胞在传代后可能会出现贴壁现象，如轻微贴壁可以轻吹收集细胞或者丢弃贴壁的细胞，贴壁较多时，可检查培养条件是否合适。