TLCK-treated Chymotrypsin 

TLCK-treated Chymotrypsin is a serine protease. Chymotrypsin cleaves protein chains at the carboxyl side of aromatic amino acids. TLCK treated to inactivate residual tryspin activity^[1][2][3].

用 1 mM HCl 配制成 10 mg/mL 浓度，并添加 2 mM 氯化钙作为稳定剂。配制好的溶液可在 4℃ 下保存一周。
蛋白质的制备
1. 溶解及变性：将蛋白质溶解在 100mM Tris-HCl, 10 mM CaCl2 (pH 8.0) 中，难以溶解或需要变性才能有效消化的蛋白质可在室温至 37 ℃ 下用最小体积溶解在变性剂（例如 6-8 M 尿素或 6 M 盐酸胍）中 1 h，对于某些蛋白质，将样品加热至 60℃ 并保持 15-20 min 可能会更有利于溶解变性；
2. 二硫化物还原：向溶解的蛋白质中添加 DTT 或β-巯基乙醇至终浓度为 5 mM。将该样品在 50-60℃ 下加热 20 min；
3. 烷基化：让还原后的蛋白质混合物冷却至室温，添加碘乙酰胺至终浓度为 15 mM；
4. 最后用 100 mM Tris-HCl, 10 mM CaCl2(pH 8.0) 调节反应体积，使尿素或盐酸胍浓度低于或等于 1 M。

酶重构
将凝乳蛋白酶溶解在 1 mM HCl 中，推荐最终浓度为 0.5-1 μg/μL。

消化
添加凝乳蛋白酶至最终蛋白酶与蛋白比例为 1：200 至 1：20 (w/w)，并在 25℃ 下孵育样品 2-18 h。也可以通过添加 0.5% 三氟乙酸来终止消化反应。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

9004-07-3

固体

White to off-white

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• [1]. W.R. Terra, et al. 4.5 - Biochemistry of Digestion, Editor(s): Lawrence I. Gilbert, Comprehensive Molecular Insect Science, Elsevier, 2005, Pages 171-224.

  [2]. Steven W. Cotton. Chapter 33 - Evaluation of exocrine pancreatic function, Editor(s): William Clarke, Mark A. Marzinke, Contemporary Practice in Clinical Chemistry (Fourth Edition), Academic Press, 2020, Pages 573-585.

  [3]. Pryor JL, et al. Putative rat sperm lipid-binding protein: isolation and partial characterization. Mol Reprod Dev. 1994 Nov;39(3):289-96.  [Content Brief]