Chymotrypsin  (Synonyms: EC 3.4.21.1; Chymotrypsin A)

Chymotrypsin (Chymotrypsin A) is a serine protease produced by the pancreas. Chymotrypsin cleaves protein chains at the carboxyl side of aromatic amino acids^[1][2].

用 1 mM HCl 配制成 10 mg/mL 浓度，并添加 2 mM 氯化钙作为稳定剂。配制好的溶液可在 4℃ 下保存一周。

蛋白质的制备
1. 溶解及变性：将蛋白质溶解在 100mM Tris-HCl, 10mM CaCl₂ (pH 8.0) 中，难以溶解或需要变性才能有效消化的蛋白质可在室温至 37 ℃ 下用最小体积溶解在变性剂（例如 6-8M 尿素或 6 M 盐酸胍）中 1 h，对于某些蛋白质，将样品加热至 60℃ 并保持 15-20 min 可能会更有利于溶解变性；
2. 二硫化物还原：向溶解的蛋白质中添加 DTT 或β-巯基乙醇至终浓度为 5 mM。将该样品在 50-60℃ 下加热 20 min；
3. 烷基化：让还原后的蛋白质混合物冷却至室温，添加碘乙酰胺至终浓度为 15 mM；
4. 最后用 100 mM Tris-HCl, 10mM CaCl₂ (pH 8.0) 调节反应体积，使尿素或盐酸胍浓度低于或等于 1 M 。
酶重构
将凝乳蛋白酶溶解在 1 mM HCl 中，推荐最终浓度为 0.5-1 μg/μL。
消化
添加凝乳蛋白酶至最终蛋白酶与蛋白比例为 1：200 至 1：20 (w/w)，并在 25℃ 下孵育样品 2-18 h。也可以通过添加 0.5% 三氟乙酸来终止消化反应。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

9004-07-3

固体

White to off-white

胰凝乳蛋白酶；糜蛋白酶

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

Please store the product under the recommended conditions in the Certificate of Analysis.

• [1]. W.R. Terra, et al. 4.5 - Biochemistry of Digestion, Editor(s): Lawrence I. Gilbert, Comprehensive Molecular Insect Science, Elsevier, 2005, Pages 171-224.

  [2]. Steven W. Cotton. Chapter 33 - Evaluation of exocrine pancreatic function, Editor(s): William Clarke, Mark A. Marzinke, Contemporary Practice in Clinical Chemistry (Fourth Edition), Academic Press, 2020, Pages 573-585.