BTBCT 

BTBCT is mainly used as a label in time-resolved fluorescence immunoassays (TRFIA). The lower limit of detection for TSH TR-IFMA is 0.011 mIU/L in a 10 μl sample volume. The high fluorescence intensity and stability of BTBCT improves the sensitivity of the assay^[1].

基于 BTBCT 的蛋白质标记：
1：将 BTBCT 粉末以 10 mg/ml 的浓度在干燥的乙醇中溶解
2：取 1 mg 的蛋白质溶解在 10 ml 的 0.1 mol/L 碳酸钠缓冲液中
3：在搅拌条件下，逐渐向蛋白质溶液中滴加 150 µl 的 BTBCT 溶液。整个添加过程要缓慢进行，以避免蛋白质沉淀
4：在室温下孵育混合物 2 小时
5：通过 0.2 µm 的 Whatman 滤膜过滤混合物
6：如果有必要，可以通过亲和层析进一步纯化标记后的蛋白质
7：将纯化后的标记蛋白在含有 0.05% NaN3 的 TSA 缓冲液中透析，然后在 4 °C 下储存或根据需要冷冻保存

间接血清 TSH TR-IFMA 实验步骤
1:微孔板涂层：在每个微孔中加入含有 15 µg/mL 的抗 -TSH McAb-05 的涂层缓冲液 30 µL。在室温下孵育 24 小时。用洗涤缓冲液洗涤两次。
2:封闭：加入封闭缓冲液 40 µL (通常含有 BSA 或其他蛋白质)， 在室温下孵育 6 小时。洗涤并空气干燥。
3:样本和标准品添加：向微孔中加入 10 µL 的 TSH 标准品或待测血清样本。加入 10 µL 含有生物素标记的抗 -TSH McAb-04 和 McAb-03 的混合物，浓度约为 30 ng/µL。在室温下轻轻摇动孵育 1 小时。
4:洗涤：用洗涤液彻底洗涤微孔板。
5:添加信号生成试剂：向每个孔中加入 20 µL 含有链霉亲和素 -BSA-BTBCT-Eu 复合物的 TSH 检测缓冲液。再次轻轻摇动孵育 20 分钟。
6:最后洗涤：洗涤四次，并使用蒸馏水洗涤两次。
7:荧光测定：使用时间分辨荧光仪测定每个孔的荧光强度。

直接血清 T4 TRFIA 实验步骤
1:微孔板准备：使用抗 -T4 抗体涂层微孔板，通常涂层浓度为 10 µg/mL。孵育涂层抗体于 4°C 过夜。
2:封闭非特异性位点：使用封闭缓冲液 (通常含有 1 % BSA) 在室温下封闭微孔板 1-2 小时。
3:样本和标记添加：向每个微孔中同时加入预定量的标记的 T4-BSA-BTBCT-Eu 复合物和待测血清样本或 T4 标准品。
4:竞争反应：在室温下孵育板 1-2 小时。
5:洗涤：使用洗涤缓冲液彻底洗涤微孔板。
6:荧光测定：使用时间分辨荧光仪测定每个微孔的荧光信号。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

604.90

C₂₆H₁₅ClF₆O₆S

525560-81-0

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• [1]. Wu FB et al.  new europium beta-diketone chelate for ultrasensitive time-resolved fluorescence immunoassays. Anal Biochem. 2002 Dec 1;311(1):57-67  [Content Brief]