DCVJ  (Synonyms: 9-(2,2-Dicyanovinyl)julolidine)

DCVJ (9-(2,2-Dicyanovinyl)julolidine), a molecular rotor and unique fluorescent dye, binds to tubulin and actin, and increases its fluorescence intensity drastically upon polymerization. DCVJ also binds to phospholipid bilayers and increases its fluorescence intensity. DCVJ can detect the kinetic process of degranulation of mast cells (Absorption/emission=489/505 nm)^[1][2].

DCVJ 检测肥大细胞脱颗粒的动力学过程^[2]
一. 实验材料
DCVJ: 用于标记细胞及监测其去颗粒化过程。
Fluo-3-AM: 用于标记细胞内钙离子。
Cytochalasin D: 主要通过抑制肌动蛋白 (actin) 的聚合来干扰细胞骨架的功能。
Compound 48/80：用于刺激肥大细胞的去颗粒化。
二. 实验步骤
1. 细胞准备
(1) 从 Wistar 大鼠腹膜腔提取肥大细胞，使用牛血清白蛋白梯度纯化细胞。
(2) 细胞用 Hepes 缓冲液 (pH 7.4) 重悬，细胞活性通过台盼蓝排除法检查，确保活性大于 95%。
2. 共聚焦荧光显微镜观察
使用共聚焦荧光显微镜进行细胞成像，观察 DCVJ 标记的肥大细胞，激发波长为 488 nm，荧光发射波长为 515 nm以上，观察室的温度控制在37°C。
3. 刺激过程
向 DCVJ 标记的肥大细胞中加入 Compound 48/80 (12.5 μg/mL) 进行去颗粒化刺激。
每 10 秒收集一次荧光图像，观察细胞的荧光强度变化，同时测量 Fluo-3 标记肥大细胞的钙离子浓度变化。
三. 荧光强度变化分析
(1) 通过图像处理软件 (如 ImageJ) 定量分析每帧图像中的荧光强度，并绘制荧光强度随时间变化的曲线，揭示去颗粒化的时序和动力学特征。
(2) 对比 DCVJ 标记和 Fluo-3 标记细胞的荧光变化，分析钙离子浓度变化与 DCVJ 荧光强度增加之间的关系，进一步了解钙离子信号在去颗粒化过程中的作用。
(3) 通过在 Cytochalasin D 存在时，比较 DCVJ 荧光强度变化，来研究细胞骨架的干扰对去颗粒化的影响。

DCVJ 监测 Amyloid β 肽早期聚集动力学^[3]
一. 实验材料
DCVJ
Amyloid β (Ab40 和 Ab42)
Epigallocatechin-3-gallate (EGCG)
二. 实验步骤
1. DCVJ 荧光测量
(1) 通过 DCVJ 荧光变化监测 Amyloid β (Ab) 聚集的动力学过程，特别是早期低聚体的形成。
(2) 将 Ab40 (80 μM) 或 Ab42 溶液加入到 DCVJ 溶液中，使其最终浓度为 8 μM 的 Ab 和 1 μM 的DCVJ。
(3) 在37°C下进行实验，并持续搅拌。
(4) 荧光激发波长设置为 465 nm，发射波长范围为 480–600 nm，监测聚集过程中的荧光变化。每 4 分钟 (Ab42) 或每 10 分钟 (Ab40) 测量一次荧光强度。
2. 时间分辨荧光测量
进一步分析 DCVJ 在 Ab 聚集体中的动态行为，通过时间分辨荧光衰减曲线探讨其分子旋转限制情况。
(1) 设置激光源：使用 1064 nm 的激光脉冲，脉冲宽度 100 ps，频率为 76 MHz。
(2) 激发光源：采用 460 nm 波长的激光进行荧光激发。
(3) 荧光检测：监测 510 nm (单体峰) 和 575 nm (激发体峰) 的荧光衰减。
(4) 时间分辨数据收集：使用 TCSPC 系统记录时间域偏振荧光衰减数据，分析在 Ab40 单体和低聚体状态下的荧光寿命变化。
3. 原子力显微镜 (AFM) 成像
通过 AFM 成像观察 Ab 聚集体的形态，验证 DCVJ 荧光数据的可靠性，并为聚集体的结构分析提供直接证据。
(1) 样品制备：取 20 μL 的 Ab 肽溶液 (WT Ab40、WT Ab42 或 F4C F19W 突变体) 吸附在新鲜裂解的云母片上，孵育 30 分钟。
(2) 样品干燥：去除多余的液体，干燥过夜。
(3) 成像：使用 Cypher S 原子力显微镜进行成像，获取不同时间点的 Ab 聚集体形态。
三. 数据分析
1. 荧光强度分析：
(1) 通过图像处理软件分析每个时间点的荧光强度，并生成相应的时间-荧光强度曲线。
(2) 进一步计算 Ab40 和 Ab42 的聚集速率，并比较不同时间点的荧光变化。
2. 时间分辨荧光寿命分析：
(1) 对比 Ab40 单体和低聚体的荧光寿命，分析 DCVJ 与 Ab 肽的结合模式。
(2) 通过寿命变化分析，了解低聚体形成和成熟的动力学特征。
3. AFM 成像后的数据分析：
(1) 使用 AFM 图像分析软件测量聚集体的大小、形态和分布，并与荧光强度变化进行比较。
(2) 验证荧光数据的可靠性，并了解聚集体的结构变化。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

249.31

C₁₆H₁₅N₃

58293-56-4

固体

Light brown to brown

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

4°C, protect from light

*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light)

* 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限：-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light)。-80°C储存时，请在6个月内使用，-20°C储存时，请在1个月内使用。

• [1]. Furuno T, et al. A fluorescent molecular rotor probes the kinetic process of degranulation of mast cells. Immunol Lett. 1992;33(3):285-288.  [Content Brief]

  [2]. Haidekker MA, et al. New fluorescent probes for the measurement of cell membrane viscosity. Chem Biol. 2001 Feb;8(2):123-31.  [Content Brief]

  [3]. Nagarajan S, et al. Fluorescent Probe DCVJ Shows High Sensitivity for Characterization of Amyloid β-Peptide Early in the Lag Phase. Chembiochem. 2017 Nov 16;18(22):2205-2211.  [Content Brief]