Ethidium homodimer  (Synonyms: EthD-1)

Ethidium homodimer (EthD-1) is a high-affinity fluorescent nucleic acid dye commonly used to stain mammals, bacteria, yeast, and fungi. Ethidium homodimer binds to DNA or RNA, enhancing fluorescence more than 30 times. The Ethidium homodimer has a strong positive charge, so it cannot cross cell membranes and stain living cells; But the Ethidium homodimer can cross the disordered region of the dead cell membrane to reach the nucleus and embed the DNA double strand to produce red fluorescence. Therefore, Ethidium homodimer is a relatively sensitive nucleic acid stain that can accurately detect nucleic acids in solution or in decomposing cells. Ethidium homodimer binds DNA, Ex/Em=528/617 nm^[1].

使用方法
EthD-1 工作液的配制
1.1 制备储存液
用 DMSO 配制 2 mM 的 EthD-1。
注：EthD-1 储存液建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存。
1.2 配制工作液
用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液，配制成 0.1-10 μM 的 EthD-1 工作液。
注：请根据实际情况调整 EthD-1 工作液浓度，且现用现配。

细胞染色
2.1 细胞准备
悬浮细胞：离心收集细胞，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。
贴壁细胞：弃去培养基，加入胰蛋白酶消化细胞。离心弃去上清后，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。
注：若不做流式实验，贴壁细胞可做爬片染色。
2.2 加入 1 mL EthD-1 工作液，室温孵育 15-60 分钟。
2.3 400 g，4℃ 离心 3-4 分钟，弃去上清。
2.4 加入 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。
2.5 用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后，在荧光显微镜或流式细胞仪下检测。

注意事项
1. EthD-1 储存液建议分装后于 -20℃ 或 -80℃ 避光保存，避免反复冻融。-20℃ 可保存 1 个月，-80℃ 可保存半年。
2. 请根据实际情况调整 EthD-1 工作液浓度。
3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

856.75

C₄₆H₅₀Cl₄N₈

61926-22-5

固体

Red to reddish brown

溴乙啡锭二聚体1

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

-20°C, sealed storage, away from moisture and light

*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)

• [1]. Joshua R Edwards, et al. A novel method for the evaluation of proximal tubule epithelial cellular necrosis in the intact rat kidney using ethidium homodimer. BMC Physiol. 2007 Feb 23;7:1.  [Content Brief]