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Anti-Flag Magnetic Beads 

Anti-Flag 磁珠

Cat. No.: HY-K0207
Manual SDS

Anti-Flag 磁珠可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 Flag (DYKDDDDK) 标记蛋白的免疫沉淀（IP）实验，也可用于免疫共沉淀 (Co-IP) 和小量的蛋白质纯化实验。

Anti-Flag Magnetic Beads

1.  客户无需承担相应的运输费用。

2.  同一机构（单位）同一产品试用装仅限申领一次，同一机构（单位）一年内

     可免费申领三个不同产品的试用装。

3.  试用装只面向终端客户。

规格 价格 是否有货 数量
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2 mL ￥4200 In-stock
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MCE 顾客使用本产品发表的 101 篇科研文献

IP

    purchased from MCE. Usage Cited in: Signal Transduct Target Ther. 2022 Aug 1;7(1):261.  [Abstract]

    Co-immunoprecipitation between APOE and ACE2 in 293T-ACE2 cells overexpressing APOE3-Flag.

    • 描述及优势

    • 储存条件 & 期限

    • 操作流程

    • 包装

    • 文件资料

    描述及优势

    Anti-Flag 磁珠由高质量的鼠源 IgG1 单克隆抗体与氨基磁珠共价偶联制备，可识别 Flag 标签 (DYKDDDDK) 重组蛋白。

     

    1. 免疫沉淀时只需少量磁珠。

    2. 方便省时。

    3. 非特异性结合率低。

    4. 样品损失少。

    5. 蛋白质结合能力高达 0.6 mg/mL。

    6. 稳定。
    储存条件 & 期限

    4°C，2 年

    请勿离心、干燥或冷冻磁珠。
    操作流程

    1. 抗原样品制备

    根据不同的样品选择合适的处理方法

    2. 磁珠预处理

    混悬 Anti-Flag 磁珠，取 10 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 500 μL 洗涤缓冲液，充分混悬，置于磁力架上磁性分离，弃上清。重复以上洗涤步骤 2 次。

    3. 样品的结合

    在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 细胞裂解液，充分混悬，置于翻转混合仪孵育，室温孵育 2 小时或者 4℃ 条件下孵育过夜。置于磁力架上磁性分离，弃上清。

    注： 结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象，不会影响实验结果。

    4. 洗涤

    在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 洗涤缓冲液，充分混悬磁珠，磁性分离，弃上清。重复以上洗涤步骤 3 次，直到洗涤后的上清液中 OD280 小于0.05 为止。

    注： 如上清液的 OD280 大于 0.05，适当增加洗涤次数即可。

    5. 洗脱

    本说明书提供三种 Flag 标签蛋白洗脱方案，操作者可以根据后期检测的需要选择不同的洗脱方案。

    1) 变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。 步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 50 μL 的 1× SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀，95°C 加热 5 分钟。分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，进行 SDS-PAGE 检测。

    2) 酸性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。 步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 50 μL 的洗脱缓冲液 A (0.15 M Glycine, pH 2.5-3.1) 混合均匀，室温孵育 10 分钟。分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，按每 50 μL 洗脱液加入 25 μL 中和缓冲液的比例加入中和缓冲液 (1 M Tris-HCl, pH 8.0)，将洗脱产物 pH 调节至中性，样品用于后期功能分析。

    3) 竞争性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。 步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 3-5 倍磁珠体积的洗脱缓冲液 B (1 mg/mL 3× Flag peptide, 50 mM Tris, 0.15 M NaCl, pH 7.4)混合均匀，室温孵育 1 小时或者 4°C 条件下孵育 1-2 小时。分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，即为目的蛋白，样品用于后期功能分析。
    包装
    Components HY-K0207-1 mL HY-K0207-2 mL HY-K0207-5 mL
    Anti-Flag Magnetic Beads 1 mL 1 mL×2 1 mL× 5
    文件资料
    Help & FAQs
    • Do most proteins show cross-species activity?

      Species cross-reactivity must be investigated individually for each product. Many human cytokines will produce a nice response in mouse cell lines, and many mouse proteins will show activity on human cells. Other proteins may have a lower specific activity when used in the opposite species.

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    产品名称：
    Anti-Flag 磁珠
    目录号：
    HY-K0207
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