HOLO Human Interleukin-8 (IL-8) Detection Kit 

HOLO 人白介素-8 (IL-8) 检测试剂盒

白细胞介素-8 (IL-8)，又称 GCP-1 和 NAP-1，是一种肝素结合型趋化因子，分子质量为 8-9 kDa，属于 α 或 CXC 趋化因子家族。IL-8 可以单体、同源二聚体以及与 CXCL4/PF4 形成的异源二聚体的形式存在。单体 IL-8具有最强的生物活性，而异源二聚体则能增强 PF4 的活性。IL-8 的低聚作用受到其与细胞外基质和细胞表面糖胺聚糖 (GAG) 相互作用的调节。在癌症中，IL-8 能够促进上皮-间质转化 (EMT)，并增强肿瘤细胞的侵袭性和转移能力。

MCE HOLO 人白介素-8 (IL-8) 检测试剂盒是一种基于双抗体夹心的均相发光法定量检测缓冲液、细胞培养上清或血清等生物样本中人 IL-8 浓度的试剂盒。

检测原理为：将受体微球（IL-8 特异性抗体 1 交联）、IL-8 特异性抗体 2（生物素标记）、待测样本混合孵育，形成双抗体夹心的免疫复合物（抗体 1 - 样本 - 抗体 2）。免疫复合物再与供体磁珠（链霉亲和素交联）共孵育形成发光复合物，实现两种微球间距 < 200 nm。当两种微球的间距 < 200 nm 时，经过激发光 (680 nm) 照射后供体微球可产生单线态氧并扩散至受体微球实现能量跃迁，受体微球吸收能量后发射散射光 (615nm)，使用感光元件收集光信号并通过数学拟合即可计算出待测样本中人 IL-8 浓度。当待测样本中不含人 IL-8 时无免疫复合体生成或两种微球间距 > 200 nm 超出单线态氧的传递距离，受体微球均不产生发射光。

MCE HOLO 人白介素-8 (IL-8) 检测试剂盒具有如下特点：

1. 操作简便：实验简单快速，无需清洗、分离操作，匹配自动化仪器；

2. 检测范围宽：动态检测范围 0 - 30,000 pg/mL，检测线性范围 5.6 - 10,000 pg/mL；

3. 灵敏度高：样本用量小灵敏度高，特异性强，可实现高通量检测；

4. 兼容性：适用于细胞培养上清、缓冲液和血清等天然样本。

4°C，1 年

避光保存，禁止冻存。

若待测样本检测浓度超过试剂盒检测上限，建议适当稀释后检测。

1. 细胞培养上清：细胞培养上清液 1,000 × g 离心 10 min，收集上清液。 注：细胞培养液中应至少添加 1% FBS 或 0.1% BSA。

注：细胞培养液中应至少添加 1% FBS 或 0.1% BSA。

2. 血清：按常规方案收集血清样本即可。

注：待测样本为血清时，建议选择阴性血清复溶/稀释标准品，其中阴性血清中人 IL-8 含量应低于检测空白限（空白限浓度见附录）。

将 IL-8 标准品（冻干粉）用 50 μL 去离子水复溶，配制成 0.3 μg/mL 的母液，然后用稀释缓冲液将母液稀释成系列梯度浓度溶液。

1. 双抗体预混液制备：20 μL A + 20 μL B，混匀待用。

注：建议双抗体预混液制备后在 1 h 内使用完毕。

2. 免疫复合物制备：将 10 μL 标准品/待测样品加入到上述双抗体预混液中，混匀。37°C 孵育 15 min 或室温孵育 60 min。

注：孵育过程建议微孔板盖盖或覆膜，防止液体挥发。

3. 发光复合物制备：在绿光或避光环境下，将 50 μL C. 供体微球（链霉亲和素交联）加入到上述免疫复合物体系中，37°C 孵育 10 min 或室温孵育 30 min。

注：a. 前后两次孵育温度需保持一致。

b. C. 供体微球（链霉亲和素交联）对光敏感，建议避光（光照度 < 100 LUX）或在绿光环境下加样及孵育。

c. 孵育过程建议微孔板盖盖或覆膜，防止液体挥发。

4. 检测：将发光复合物置于均相化学发光仪或含 Alpha 模块的多功能酶标仪中进行仪器读数 RLU。

5. 标准曲线绘制：以 IL-8 浓度 (pg/mL) 为横坐标，RLU 为纵坐标绘制标准曲线。

注：建议每次检测重新绘制标准曲线，标准品每个浓度做 2 - 3 个复孔。

6. 计算：根据标准曲线计算出待测样品中 IL-8 浓度。

1. 建议标准品在复溶后进行适当分装冻存于 -20°C 中，避免反复冻融。

2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。