Human CD8⁺ T Cells Negative Selection Kit 

人 CD8+ T 细胞阴性分选试剂盒

MCE 人 CD8⁺ 细胞阴性分选试剂盒可从人外周血单个核细胞 (PBMC) 中分离出 CD8⁺ T 细胞。原理为生物素 (Biotin) 标记的单克隆抗体对非目标细胞（非 CD8⁺ T 细胞）进行标记，再通过链霉亲和素 (Streptavidin) 标记的磁珠对非目标细胞进行去除，从而达到人 CD8⁺ T 细胞分选的目的。

本试剂盒操作简单，各成分对细胞均无毒性，且可实现高纯度细胞分离的目的，适用于从新鲜分离或冻存的人外周血单个核细胞 (PBMC) 中分选出 CD8⁺ T 细胞。分离的细胞可用于下游应用，如流式细胞术、细胞培养、Western blot 分析、免疫沉淀、报告基因检测或 DNA/RNA 提取等。

MCE 人 CD8⁺ T 细胞阴性分选试剂盒具有如下优点

1. 简单快速：30 min 即可分选得到目的细胞；

2. 无需分离柱：使用磁性分离器即可实现目的细胞的快速分离；

3. 高纯度：分选细胞纯度可达 90%；

4. 高活性：分选后细胞无抗体和磁珠标记，活性高且功能良好可用于下游实验。

4℃，2 年

磁珠禁止冻结

1. 磁珠准备：充分重悬链霉亲和素磁珠，取 20 μL 至 1.5 mL EP 管中，加入 1 mL 分选缓冲液，10,000 × g 离心 1 min，弃上清。重复洗涤磁珠 1 - 2 次，加 20 μL 分选缓冲液重悬磁珠。

注：最后磁珠重悬分选缓冲液的用量与初始吸取磁珠体积需一致。

2. 制备人外周血单核细胞 (PBMC) 悬液：通过 Ficoll 密度梯度离心法从人外周血中分离并收集 PBMC，PBS 洗涤细胞并离心。将 PBMC 重悬于分选缓冲液中，调整细胞密度为 1×10⁸ cells/mL。

3. 抗体标记：取 100 μL 细胞悬液（1 × 10⁷ 个细胞）加入无菌流式管底部，再加入 2 μL 生物素化抗体预混液，混匀后 4°C 孵育 15 min。

注：a. 细胞悬液直接加入流式管底部，避免沿管壁加入。

b. 如果分选更多细胞，可按比例增加生物素化抗体预混液的用量。

4. 细胞洗涤：细胞-抗体孵育完成后，用 10 倍体积分选缓冲液洗涤细胞 1 次，500 g 离心 5 min，弃上清。

5. 磁珠标记：离心完成后用 100 μL 分选缓冲液重悬细胞，加入 20 μL 清洗过的磁珠，混匀后 4°C 孵育 10 min。

注：如果分选更多细胞，则按比例增加磁珠用量。例如分选 5 × 10⁷ 个细胞，在 500 μL 细胞悬液中加入 10 μL 抗体预混液和 100 μL 磁珠。如果分选少于 1 × 10⁷ 个细胞，则将细胞悬液体积补至 100 μL，加入 2 μL 抗体预混液和 20 μL 磁珠。

6. 洗涤：孵育完成后，在流式管中加入 2.5 mL 分选缓冲液，用移液器轻柔吹吸混匀（避免剧烈振荡或者上下颠倒混匀）。

7. 分选：将含有细胞的分选流式管置于磁性分离器上，磁性分离 5 min。

8. 收集细胞：将细胞悬液轻柔倒入一个无菌离心管中（倾倒过程中流式管不可脱离磁性分离器），此细胞悬液中即包含纯化的小鼠中性粒细胞，500 × g 离心 5 min。离心后弃上清，收集细胞。

9. 根据实验需要洗涤细胞，将细胞重悬于所需缓冲液或培养基中，即可用于后续分子生物学或细胞生物学实验。

注：如需进一步提高细胞的纯度，可将细胞悬液 500 g 离心 5 min，弃上清并用 100 μL 分选缓冲液重悬细胞，参考如上步骤进行二次纯化，二次纯化细胞纯度可提高 2% - 4%。

1. 生物素化抗体预混液使用和保存过程中均应避免反复冻融、高速离心等操作。

2. 建议选用低吸附移液器吸头和离心管等耗材，避免因吸附造成磁珠和抗体的损耗。

3. 磁珠在使用和保存过程中应避免高速离心、干燥或冻存；磁珠禁止长时间置于磁场，否则会引起磁珠聚团结块，降低其结合活性。

4. 从磁珠保存管中吸取磁珠前应充分振荡混匀，操作过程中动作应轻柔，并避免产生气泡。

5. 本品需要与磁性分离器配套使用。

6. 实验操作过程需轻柔，避免对细胞造成机械损伤。

7. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。