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Ni-NTA His-Tag Purification Agarose 

His标签纯化凝胶珠(Ni-NTA)

Cat. No.: HY-K0210
Manual SDS

MCE His标签纯化凝胶珠 (Ni-NTA) 以高度交联的 6% 琼脂糖凝胶为基质,可实现高产量,高纯度的 His 标记蛋白的纯化。

Ni-NTA His-Tag Purification Agarose

1.  客户无需承担相应的运输费用。

2.  同一机构(单位)同一产品试用装仅限申领一次,同一机构(单位)一年内

     可免费申领三个不同产品的试用装。

3.  试用装只面向终端客户

规格 价格 是否有货 数量
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5 mL ¥580 In-stock
10 mL ¥950 In-stock
50 mL ¥3550 In-stock
250 mL ¥15500 In-stock

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    purchased from MCE. Usage Cited in: Oxid Med Cell Longev. 2021 Aug 21;2021:5526053.  [Abstract]

    CPPs-SOD1 were expressed, purified, and detected by Coomassie brilliant blue staining (upper panel) and Western blot (lower panel).
    • 描述及优势

    • 储存条件 & 期限

    • 操作流程

    • 包装

    • 文件资料

    描述及优势

    MCE His标签纯化凝胶珠 (Ni-NTA) 以高度交联的 6% 琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联了四配位的氮川三乙酸 (NTA),螯合镍离子 (Ni2+) 后,可以形成非常稳定的八面体结构,更加稳定、高效。

    本产品可以用于纯化细菌、哺乳动物细胞、昆虫及杆状病毒等表达的 His 标签重组蛋白。

     

    本产品的规格与实际凝胶体积一致,凝胶含量为 50%。

    储存条件 & 期限

    4°C,2 年

    请勿干燥或冷冻琼脂糖珠。

    操作流程

    1. Buffer 的准备

    Lysis Buffer,Wash Buffer,Elution Buffer。

    注:根据不同的样品选择合适的 Buffer,也可根据自己的使用习惯配制不同的缓冲液体系,基本原则是“低咪唑上样,高咪唑洗脱”,或者“高 pH 上样,低 pH 洗脱”。Buffer 在使用前用 0.22 μm 或者 0.45 μm 滤膜过滤除菌。

    2. 样品处理

    细菌或酵母表达的蛋白

    1) 挑取单菌落到培养基,根据载体使用说明加入相应浓度的诱导剂诱导相应的时间。

    2) 表达结束后,收集菌液至离心管中,7000 rpm,离心 15 分钟,弃上清,收集菌体沉淀。随后加入 1/10 体积的 Lysis Buffer 和蛋白酶抑制剂。加入溶菌酶 (工作液浓度为 0.2-0.4 mg/mL;如果表达的宿主细胞内含 pLysS 或 pLysE,可以不加溶菌酶),需确认加入的蛋白酶抑制剂不会影响目的蛋白与 Agarose 的结合。

    3) 将菌体沉淀重悬混匀 (如果菌液浓度高,也可选择加入 10 μg/mL RNase A 和 5 μg/mL DNase I),放置在冰上,然后冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。

    4) 将澄清的破碎液转移至离心管中,10000 rpm,4℃ 离心 20-30 分钟。取上清,置于冰上备用或 -20℃ 保存。

    酵母、昆虫和哺乳动物分泌表达可溶性蛋白

    1) 将细胞培养液收集至离心管中,5000 rpm,离心 10 分钟,取上清,弃沉淀,如上清中不含 EDTA、组氨酸和还原剂等物质,可直接加入柱子进行后续操作;如含有 EDTA、组氨酸和还原剂等物质,需用 1×PBS 在 4℃ 条件下经透析后才能加入柱子。

    2) 对于大量体积的上清,需加入硫酸铵沉淀浓缩后,用 1×PBS 在 4℃ 条件下经透析后才能加入柱子。

    包涵体蛋白 (变性条件)

    1) 将培养液收集至离心管中,7000 rpm,离心 15 分钟,弃上清,收集菌体沉淀。

    2) 按照菌体: Lysis Buffer=1:10 (W/V) 的比例将菌体重悬混匀,冰浴超声破碎。

    3) 将破碎液转移至离心管中,10000 rpm,4℃ 离心 20-30 分钟。弃上清,重复步骤 (2) 和步骤 (3) 一次。

    4) 按照菌体: Lysis Buffer (含 8 M 尿素)=1:10 (W/V) 的比例将包涵体悬浮起来。

    5) 变性条件下进行His标签重组蛋白纯化操作。

    3. Ni-NTA His-Tag Purification Agarose 的装填

    1) 用去离子水冲洗柱底筛板,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出 1-2 cm 的去离子水。

    2) 将 Agarose 悬浮混匀,小心地将浆液连续地倒入柱管中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。

    3) 打开柱底部出口,最初让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速,这样可避免液压对所形成柱床的冲击,得到很好的装填效果。当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上 3 倍柱体积的去离子水。标记柱床高度。

    4) 关闭柱底部出口。

    4. 样品纯化

    1) 平衡:使用至少 5 倍柱体积的 Lysis Buffer 平衡层析柱。

    2) 上样:利用泵或注射器上样。为了避免堵塞层析柱,样品应经离心或使用滤膜 (0.22 μm 或 0.45 μm)过滤。

    3) 洗杂:用 Wash Buffer 冲洗柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线 (一般至少 10-15 倍柱体积),收集流出组分和洗杂部分。

    注:在平衡缓冲液加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。

    4) 洗脱:用 Elution Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常 5 倍柱体积洗脱液就足够了;线性梯度洗脱可以用一个小的梯度,例如 20 倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

    5) SDS-PAGE 检测:将纯化得到的样品 (包括流出组分、洗杂部分和洗脱部分)以及原始样品使用 SDS-PAGE 检测纯化效果。

    包装
    Components HY-K0210-5 mL HY-K0210-10 mL HY-K0210-50 mL HY-K0210-250 mL
    Ni-NTA His-Tag Purification Agarose (Settled Resin) 5 mL 10 mL 50 mL 50 mL×5
    文件资料
    Help & FAQs
    • Do most proteins show cross-species activity?

      Species cross-reactivity must be investigated individually for each product. Many human cytokines will produce a nice response in mouse cell lines, and many mouse proteins will show activity on human cells. Other proteins may have a lower specific activity when used in the opposite species.

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    产品名称:
    His标签纯化凝胶珠(Ni-NTA)
    目录号:
    HY-K0210
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