OptiLNP CRISPR Gene Editing Kit (Immune Cells) 

OptiLNP CRISPR 基因编辑试剂盒（免疫细胞）

脂质纳米粒 (Lipid Nanoparticles, LNP) 是一种以脂质为基础构建的纳米级药物递送系统，广泛应用于核酸（如 mRNA、siRNA、DNA 等）和小分子药物的递送。

裸露的 RNA 是一种带负电荷的亲水性大分子，由于细胞膜的的静电排斥作用，RNA 难以进入细胞，且容易被 RNA 酶迅速降解。通过利用 LNP 包封 RNA，可以使 RNA 通过细胞膜并在细胞质中释放，实现高效递送。

MCE OptiLNP CRISPR 基因编辑试剂盒（免疫细胞）是一种基于脂质纳米粒 (LNP) 技术开发的即用型转染试剂，利用 LNP 特有的跨膜转运及逃逸机制可实现 RNA 的高效递送，适用于免疫细胞 CRISPR 基因编辑时 Cas9 mRNA 和 sgRNA 的共转染。

MCE OptiLNP CRISPR 基因编辑试剂盒（免疫细胞）具有如下优点：

1. 脂质纳米粒 (LNP) 技术：采用 LNP 载体，有效保护 RNA 免受递送过程中的降解和免疫系统清除的影响；

2. 高效的细胞内递送：LNP 特有的跨膜转运及逃逸机制，微量样品的包封率超过 80%，；

3. 操作简便：无需包封设备，仅需一步混合即可完成 RNA-LNP 包封并进行转染；

4. 生物相容性好：细胞毒性低，能较好平衡高转染效率与细胞活力，作用温和；

5. 安全：配方不含乙醇，采用可降解脂质材料，确保安全性。

转染试剂和稀释缓冲液：4°C，1 年，禁止冻结。

Cas 9 mRNA（冻干）、sgRNA 阳性对照（冻干）和sgRNA 阳性对照引物：-20°C ，1 年。

以 24 孔板为例，其它培养孔板细胞量根据常规实验设计即可。

悬浮细胞：转染当天，配制转染试剂-核酸复合物之前，先进行细胞铺板，每 500 μL 生长培养基中加入 0.5 - 2.5 × 10⁵ 个细胞。

注：为提高转染效率，建议使用生长状态良好且生长处于指数期、存活率大于 90% 的细胞进行转染。

1) 用无酶水将 Cas9 mRNA（冻干）配制成 1 μg/μL 的原液。

2) 用无酶水将 sgRNA 阳性对照（冻干）配制成 1 μg/μL 的原液。

取适量 Cas9 mRNA 原液与 sgRNA 阳性对照原液，并用稀释缓冲液将原液稀释至总 RNA 浓度为 40 ng/μL。

直接取等体积转染试剂与 RNA 预混液混合，用移液枪吹打 20 次以上使其充分混匀。

将 RNA-LNP 复合物加入细胞中，轻柔混匀，置于培养箱中继续培养。

转染细胞培养 24 - 48 h 后，可使用荧光检测法、Western Blot、ELISA、流式细胞术、报告基因等检测转染效果，或进行后续功能实验。

1. 本品经过 0.22 μm 滤膜过滤。

2. Cas9 mRNA 和 sgRNA 阳性对照均为冻干粉，开盖前请先离心。使用无酶灭菌水溶解配制成 1 μg/μL 的原液，原液 -80°C 可保存 6 个月，避免反复冻融。

3. 为了获得较高的转染效率，RNA 原液建议使用无酶灭菌水，其他类型的溶剂对转染效率可能会有影响。建议使用商业化 RNA，对于自行准备的 RNA 需要经过纯化和脱盐处理以防止 RNA 沉淀。

4. 建议制备 RNA 预混液使用试剂盒配套的稀释缓冲液稀释 RNA 原液。

5. RNA-LNP 复合物室温可稳定保存 8 h，请勿将 RNA-LNP 复合物置于冷冻条件。

6. RNA-LNP 复合物如需稀释，建议使用试剂盒配套的稀释缓冲液稀释。

7. RNA/LNP 比例是 LNP 包封的关键，如需调整转染每孔 RNA 用量，可按比例调整加入细胞的每孔 RNA-LNP 复合物的体积。

8. Cas9 mRNA 与 sgRNA 共转染时，RNA 预混液浓度为 Cas9 mRNA + sgRNA 的总浓度，推荐比例：μgmRNA:μgsgRNA = 1:1 - 1:2。

9. 转染前后无需更换培养基，含血清、双抗的完全培养基对转染效果无明显影响。

10. 转染后 6 h 可按细胞常规培养流程进行换液或其他操作。

11. 细胞状态会极大影响转染效率，建议使用生长状态良好的细胞进行转染。

12. 影响转染效率的因素有很多，如细胞类型、细胞状态及密度、核酸质量及浓度、转染试剂与核酸比例等，建议先做预实验摸索最佳转染条件。

13. 为避免 RNA 酶污染，整个实验过程使用无 RNA 酶和无热原性的材料，如离心管、枪头等。

14. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

15. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。