MicroRNA Inhibitor Negative Control 

MicroRNA Inhibitor Negative Control is a full-length nucleotide 2'-methoxy modified oligonucleotide, and can be used as a negative control. The sequence of MicroRNA Inhibitor Negative Control is derived from cel-mir-239b. It has minimal sequence identity with miRNAs in human, mouse, and rat.

1. miRNA的配制

1.1 miRNA产品呈透明或半透明的干膜状附着在管壁上，使用前将试管瞬时离心，以确保 miRNA 位于试管底部。使用不含核酸酶的水重新配制 miRNA，得到20 μM的母液。

对于5 nmol miRNA：加入250 μL 无核酸酶水，涡旋振荡数次溶解。

对于20 nmol miRNA：加入1000 μL 无核酸酶水，涡旋振荡数次溶解。

1.2 (可选) 将 miRNA 分装到一个或多个管子中以减少冻融的次数（<5）。

1.3 将配制好的母液在-20℃或-80℃条件下保存。

2. 准备细胞

2.1 预先接种细胞，待达到合适的细胞密度时进行细胞转染。转染前细胞活力影响转染结果。

3. 转染

3.1 制备转染混合物A和B

注：对于 miRNA inhibitors，我们推荐的工作浓度为100nM。miRNA 产品最佳工作浓度因不同的细胞类型及研究目的而异，这取决于miRNA、细胞系和选择的分析方法。为了确定最佳结果的浓度，应该使用不同的浓度进行优化实验。优化后的浓度范围为 20~500nM。

6孔板的每孔：A: 240 μL无血清培养基+ 10 μL miRNA；B: 230 μL无血清培养基+ 20 μL HY-K2017 siRNA/miRNA Transfection Reagent

12孔板的每孔：A: 95 μL无血清培养基+ 5 μL miRNA；B: 90 μL无血清培养基+ 10 μL HY-K2017 siRNA/miRNA Transfection Reagent

24孔板的每孔：A: 47.5 μL无血清培养基+ 2.5 μL miRNA；B: 45 μL无血清培养基+ 5 μL HY-K2017 siRNA/miRNA Transfection Reagent

96孔板的每孔：A: 24.5 μL无血清培养基+ 0.5 μL miRNA；B: 24 μL无血清培养基+ 1 μL HY-K2017 siRNA/miRNA Transfection Reagent

如果使用其他品牌的转染试剂，需要根据具体情况调整转染试剂加入的量。

3.2 将稀释好的 A 和 B 轻轻混合。室温孵育15-20分钟。

3.3 从细胞中去除培养基，用 PBS 洗涤。

3.4 向细胞中添加 miRNA-转染试剂混合物。

6孔板的每孔：加入1500 μL不含血清的新鲜培养基，然后加入500 μL的转染混合物 (A+B)，混匀。

12孔板的每孔：加入800 μL不含血清的新鲜培养基，然后加入200 μL的转染混合物 (A+B)，混匀。

24孔板的每孔：加入400 μL不含血清的新鲜培养基，然后加入100 μL的转染混合物 (A+B)，混匀。

96孔板的每孔：加入50 μL不含血清的新鲜培养基，然后加入50 μL的转染混合物 (A+B)，混匀。

3.5 在37℃孵育细胞1-3天。然后分析转染细胞。可在转染约 6 小时后将无双抗和血清培养基更换为正常含血清和双抗培养基。

注：转染时的培养基中不要加入抗生素，否则会降低细胞转染的效率，甚至导致细胞死亡。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

6953.56

MI0000315

UUUGUACUACACAAAAGUACUG

cel-miR-239b

GCGACAGAUGCAAUUUUUGUACUACACAAAAGUACUGGUCAUUUAAGUUGAGGCUCAGCACUUUUGUGGUGUGCAAAAAUGGCAAGUUGCUUUUAUCU

Caenorhabditis elegans

固体

White to off-white

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

-20°C, sealed storage, away from moisture

*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture)

• [1]. Xia W, Huang J, Sun C, Shen F, Yang K. MicroRNA‑1224 inhibits cell proliferation by downregulating CBX3 expression in chordoma. Oncol Lett. 2024;27(6):262.  [Content Brief]