Transglutaminase, Streptoverticillium mobaraense  (Synonyms: TG)

Transglutaminase, Streptoverticillium mobaraense (TG) is an enzyme that forms cross-links between protein molecules. Transglutaminase, Streptoverticillium mobaraense attaches proteins and peptides to small molecules, polymers, surfaces, DNA and other proteins. Transglutaminase, Streptoverticillium mobaraense is widely used in food applications in the meat, fish, dairy and baking industries^[1][2][3].

Tissue Transglutaminase 用于检测 T 细胞增殖实验^[4]
(1) 在 96 孔板中用完全 RPMI 和经过热灭活的 10% 人 AB 血清培养 PBMC 细胞，每孔 1×10⁵ 细胞。加入 12 μg/mL 肽，50 μg/mL 经胰凝乳蛋白酶消化的麦醇溶蛋白，或磷酸盐缓冲液，同时添加 Tissue Transglutaminase。每孔总体积为 200 μL，在 37°C、5% CO₂ 和湿润的空气中孵育 5 天。
(2) 向每孔中加入 1 微居里的 ³H-胸腺嘧啶。再继续孵育 18 小时后，使用细胞收集器和放射性计数器测量 DNA 中的 ³H掺入量。结果以测试样本的每分钟计数 (c.p.m.) 表示。
Tissue Transglutaminase 用于 HLA II 类限制性实验^[4]
(1) 麦醇溶蛋白 (100 mg/ml) 用α-胰凝乳蛋白酶 (重量比 200:1) 在室温下于 0.1 M 碳酸氢铵和 2 M 尿素中进行消化。
(2) 消化过程持续 24 小时后，通过将样品加热至 98℃ 10 分钟来终止反应。
(3) 样品以 13,000 g 离心 10 分钟后，收集上清液，并使用 0.2 微米滤膜进行无菌过滤。
(4) 通过 SDS-PAGE 验证麦醇溶蛋白的消化情况，并测定蛋白质浓度。
(5) 将麦醇溶蛋白 (640 µg/mL) 和合成的麦醇溶蛋白肽段 (15 个氨基酸的肽段: 160 µg/mL，其他肽段: 0.1 mM) 分别与 α-胰凝乳蛋白酶消化后的产物一起，在 37℃ 下用 50 µg/mL 的 Tissue Transglutaminase 在含有 1 mM CaCl₂ 的 PBS 缓冲液中处理 2 小时。
(6) 处理后的肽段和肽段混合物被分装到无菌的 96 孔板中，并在 -20℃ 下冷冻保存。
(7) 将抗 CD4 或 CD8 抗体的磁珠用RPMI培养基清洗四次。并与 5×10⁶ PBMC 细胞一起在冰上孵育 30 min。
(8) 移除磁珠，并进行细胞计数。
(9) 将 5×10⁶ PBMC 细胞与针对 HLA-DR (L243)、HLA-DQ (L2) 和 HLA-DP (B7.21) 的单克隆抗体 (各 10 μg/mL) 在室温下预孵育 1 小时。
(10) 随后加入肽段，使用 ELISPOT 方法检测 IFN-γ 的分泌量，评估 T 细胞对肽段的反应。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

80146-85-6

固体

White to yellow

转谷氨酰胺酶

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

Please store the product under the recommended conditions in the Certificate of Analysis.

• [1]. Kieliszek M, Misiewicz A. Microbial transglutaminase and its application in the food industry. A review. Folia Microbiol (Praha). 2014 May;59(3):241-50.  [Content Brief]

  [2]. Pavel Strop, et al. Versatility of microbial transglutaminase. Bioconjug Chem. 2014 May 21;25(5):855-62.  [Content Brief]

  [3]. Anna Bérot, et al. Generation of Anti-Epidermal Growth Factor Receptor‑2 (HER2).ACS Pharmacology & Translational Science.2024 American Chemical Society

  [4]. R P Anderson, et al. In vivo antigen challenge in celiac disease identifies a single transglutaminase-modified peptide as the dominant A-gliadin T-cell epitope. Nat Med. 2000 Mar;6(3):337-42.  [Content Brief]