Vari Fluor 640 SE  (Synonyms: VF 640 SE)

Vari Fluor 640 SE (VF 640 SE) is a dye marker of the Vari Fluor SE series (Ex/Em=648 nm/664 nm). The Vari Fluor SE series of dyes are a class of fluorescent dyes containing NHS ester groups used to label free amines (-NHX) on antibodies, proteins, peptides, amine-modified oligonucleotides and other biomolecules.

原液制备
1.蛋白准备
为了获得最佳标记效果，请将蛋白 (抗体) 浓度配制为 2 mg/mL。
1) 蛋白溶液 pH 值应为 8.5±0.5，若 pH 低于 8.0，则用 1 M 碳酸氢钠进行调整。
2) 若蛋白浓度低于 2 mg/mL，标记效率会大大降低，为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。
3) 蛋白必须在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和铵离子的缓冲液中，否则会影响标记效率。
2.染料准备
将无水 DMSO 稀释 VF 染料，制成 10 mg/mL 储备溶液。通过玻璃管或旋涡充分混合。
注：VF 储存液建议分装后于 -20 °C 或 -80 °C 避光保存。
3.染料工作液用量计算
标记反应所需的 VF 染料用量取决于要标记蛋白的用量，VF 染料与蛋白的最佳摩尔比为 10 左右。
例：假如所需标记蛋白为 500 μL 2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000)，用 100 μL DMSO 溶解一管 1 mg VF 染料，则所需 VF 体积为 3.95 μL，详细计算流程如下 (以 VF 488 为例)：
1) mmol (IgG) = mg/mL (IgG)×mL (IgG) / MW (IgG) =2 mg/mL×0.5 mL / 150,000 mg/mmol= 6.7×10^-6 mmol
2) mmol (VF 488) = mmol (IgG)×10 =6.7×10^-6 mmol×10 = 6.7×10^-5 mmol
3) μL (VF 488) = mmol (VF 488)×MW (VF 488) / mg/μL (VF 488) = 6.7×10^-5 mmol× 834 mg/mmol / 0.01 mg/μL = 5.6 μL (VF 488)

使用方法
1.标记反应
1) 取算好体积的新鲜配制的 10 mg/mL VF 染料缓慢加入到 0.5 mL 蛋白样品
溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀，防止蛋白样品变性失活。 2) 将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育 60 分钟，每隔 10-15 分钟，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合两种反应物，提高标记效率。
2. 蛋白纯化脱盐
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱纯化染料蛋白偶联物为例。
1)按照生产说明书制备 Sephadex G-25 柱。
2)将反应混合物装入 Sephadex G-25 色谱柱顶部。
3)当样品运行到顶部树脂表面下方时，立即加入 PBS (pH 7.2-7.4)。
4)向所需样品中加入更多的 PBS (pH 7.2-7.4)，完成柱纯化。结合含有所需要的染料-蛋白质缀合物的组分。

保存条件
-20℃ 避光保存

注意事项
1.VF 染料对光及湿度敏感。即用即配 VF 溶液并丢弃未使用的部分。
2.低浓度的叠氮化钠 (≤3 mM 或 0.02％) 或硫柳汞 (≤0.02 mM 或 0.01％) 不会显著干扰蛋白标记；但是 20-50％ 的甘油会降低标记效率。
3.避免使用含伯胺 (例如 Tris，甘氨酸) 或铵离子的缓冲液，它们与待标记蛋白会发生竞争反应降低标记效率。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

固体

Brown to dark brown

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

-20°C, protect from light

*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light)

• [1]. Nanda JS, et al. Labeling a protein with fluorophores using NHS ester derivitization. Methods Enzymol. 2014;536:87-94.  [Content Brief]