Alcian Blue 8GX  (Synonyms: 阿尔新蓝8GX)

Alcian Blue 8GX is a commonly used phthalocyanine dye that binds to glycoproteins and glycosaminoglycans. Alcian Blue 8GX has a wide range of applications in biological staining, including proteins in brain tumors and DNA in cells and tissues^[1][2][3][4].

Alcian Blue 8GX 工作液配置^[1]
配制 1 mg/mL 的 Alcian Blue 8GX: 将 0.6 mL 冰醋酸加入 dd H2O 中，使终体积为 20 mL。再加入 20 mg Alcian Blue 8GX，充分溶解。
Alcian Blue 8GX 染色细胞微团培养^[1]
(1) 配制预处理液 A: 将 0.5 mL 氢氧化铵溶液加入 500 mL 70% 乙醇中。
(2) 配制预处理液 B: 向 70% 乙醇中加入25 mL 冰醋酸，使终体积为 500 mL。
(3) 从微团培养中弃去培养基，使用1 mL 的 Bouin's 固定液在室温下固定 15 分钟。
(4) 用预处理液 A 和 B 清洗。
(5) 用 2 mL 的 1 mg/mL Alcian Blue 8GX 在室温下染色 1 小时。
(6) 用双蒸水洗掉染料，重复四次。并浸泡在 2 mL 双蒸水中。
(7) 拍摄照片。
(8) 用双蒸水再次洗掉染料。
(9) 通过将培养物与 1 mL 的 6 M 盐酸胍在室温下孵育过夜来提取染料。
(10) 使用分光光度计在 OD 595 处测量光密度。
细胞培养注意事项^[1]
(1) 避免细胞死亡: 为了防止细胞死亡，胚胎/细胞在接种前应始终保持在冰上。
(2) 细胞活力低于 70-80% 时的处理: 如果细胞活力低于 70-80%，可以考虑使用死细胞去除试剂盒 (如 Miltenyi 死细胞去除试剂盒，Miltenyi Biotech，货号: 130-090-101) 来去除死细胞。
(3) 细胞接种于 35 mm 培养皿: 当细胞接种于 35 mm 培养皿时，应保持高密度细胞区域。培养 1.5 小时后，细胞应已贴壁。小心加入含有纤连蛋白的高级 DMEM 培养基。
(4) 分离细胞的使用与传代: 分离出的细胞可以在分离当天用于微团培养。然而，这些细胞最多可以传代三次，从分离开始的总培养时间不应超过 10 天。
Alcian Blue 8GX 染色糖胺聚糖^[2]
(1) 肥大细胞用甲醇-40%甲醛-乙酸 (85:10:5 体积比)固定 30 min，冲洗后对细胞进行染色。
(2) 用 0.5% (w/v) Alcian Blue 8GX 溶解在 3% (v/v) 醋酸中，pH 2.4，染色 0.5 或 2 小时。
(3) 与 (1) 相同的饱和了尿素的溶液，用 HCl 将 pH 恢复至 2.4，染色时间为 0.5 小时。
(4) 与 (1) 相同的溶液染色 0.5 小时后，再用溶解在 0.125 N HCl 中的 0.3% (w/v) 苏木精 O (pH 0.9) 染色 5 分钟。
(5) 染色之后分别用蒸馏水冲洗，风干，并用 Entellan 封片。
(6) 为了检测组胺的存在，将大鼠腹膜肥大细胞的未固定或固定的涂片风干后，用 1% (w/v) 邻苯二甲醛 (OPT) 溶解在二甲苯中进行染色 (染色时间 2 分钟)。染色过程在相对湿度100%的室温密闭室内进行。染色完成后，玻片被沥干并立即用四氢糠醇封片。
(7) 使用配备Leitz Ploemopak 2 (用于入射荧光) 和 75 W 高压氙灯的 Leitz Orthoplan 显微镜检查肥大细胞颗粒中组胺-OPT 复合物的黄色荧光强度。使用的滤光系统包括一个 TK 510/K 515 二向色镜、一个 K 510 阻挡滤光片和一个 2 x KP 490 (= KP 500) 激发滤光片。
Alcian Blue 8GX 染色胎儿软骨^[3]
(1) 大鼠胎取自交配雌性 Spraque-Dawley 大鼠。在妊娠第 21 天 (精子/塞第 5 天，妊娠第 0 天)，采用二氧化碳窒息法安乐死。采用标准剖宫产方法获得胎儿，随后通过口服戊巴比妥钠实施安乐死。新西兰白兔和荷兰带兔在交配时是 5-6 个月大，孕兔于妊娠第 28 天处死，静脉注射戊巴比妥钠获得胎儿。每个胎儿均口服戊巴比妥钠处死。
(2) 胎儿取出内脏，剥皮并固定在 70% 乙醇中 3-7 天。
(3) 先将 8 份 95% 乙醇和2 份冰乙酸配制成混合液，再加入 Alcian Blue 8GX 配制为浓度为 75 和 100 mg/L 的溶液。 (4) 大鼠胎儿在 Alcian Blue 8GX (100 mg/L ) 中染色 24 h，兔子胎儿在 Alcian Blue 8GX (75 mg/L) 中染色 24 h，然后在 95% 乙醇中冲洗 6 h。
(5) 将大鼠和兔子胎儿分别浸泡在 1% 和 1.25% 氢氧化钾中，大鼠胎儿用 12 mg/L Alizarin Red S (HY-120601) 染色 48 h，兔子胎儿用 6 mg/L Alizarin Red S (HY-120601) 染色 24 h。
(6) 转移到 70% 乙醇和甘油 (1:1) 的溶液中进行清理，硬化和检查。
Alcian Blue 8GX 用于蛋白质测定^[4]
(1) 将目标蛋白用水或 0.1 M NaCl 溶液溶解，工作浓度为 25 μg/ml。
(2) 使用 Britton-Robinson buffer (pH 7.24， 含0.04 M H3PO4，0.04 M HAc和0.04 M H3BO3) 控制酸度，用0.5 M NaCl 溶液调节水溶液的离子强度。
(3) 在 10 mL 容瓶中加入适当的蛋白质工作液，1.0 mL 的 Britton-Robinson buffer 和适当的 Alcian Blue 8GX 溶液。除 IgG 用 0.1 M NaCl 外，其余均用双蒸水将混合物稀释至 10 mL。
(4) 将混合物用于吸收或者 RLS 测量。通过调节 RF-540 荧光光谱仪的激发和发射单色器 (∆λ = 0 nm) 对 RLS 光谱进行扫描。RLS 强度在 398.0 nm 处测定，可以测定包括牛血清白蛋白 (BSA)、人血清白蛋白 (HAS)、胃蛋白酶 (Pep) 和纤维素酶 (Cel) 在 内的蛋白质，检测限为 30 ng/mL 以下。
(5) Alcian Blue 8GX 与 BSA 相互作用的 RLS 光谱。浓度为 1.0 × 10^-5 M。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

1298.86

C₅₆H₆₈Cl₄CuN₁₆S₄

33864-99-2

固体

Dark purple to black

阿尔新蓝8GX

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

4°C, sealed storage, away from moisture and light

*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)

* 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限：-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)。-80°C储存时，请在6个月内使用，-20°C储存时，请在1个月内使用。

• [1]. Hiroki Ueharu, et al. Isolation and Culture of Cranial Neural Crest Cells from the First Branchial Arch of Mice. Bio Protoc. 2022 Apr 5;12(7):e4371.  [Content Brief]

  [2]. J Tas, et al. The Alcian blue and combined Alcian blue--Safranin O staining of glycosaminoglycans studied in a model system and in mast cells. Histochem J. 1977 Mar;9(2):205-30.  [Content Brief]

  [3]. Brian G Redfern, et al. An alternative Alcian Blue dye variant for the evaluation of fetal cartilage. Birth Defects Res B Dev Reprod Toxicol. 2007 Jun;80(3):171-6.  [Content Brief]

  [4]. Yuan Fang Li, et al. Determination of Proteins Based on Their Resonance Light Scattering Enhancement Effect on Alcian Blue 8GX. Original Papers. 2000 Dec; VOL.16