OptiLNP RNA Transfection Reagent (Primary Immune Cells) 

OptiLNP RNA 转染试剂（原代免疫细胞）

脂质纳米粒 (Lipid Nanoparticles, LNP) 是一种以脂质为基础构建的纳米级药物递送系统，广泛应用于核酸（如 mRNA、siRNA、DNA 等）和小分子药物的递送。.

裸露的 RNA 是一种带负电荷的亲水性大分子，由于细胞膜的的静电排斥作用，RNA 难以进入细胞，且容易被 RNA 酶迅速降解。通过利用 LNP 包封 RNA，可以使 RNA 通过细胞膜并在细胞质中释放，实现高效递送。

MCE OptiLNP RNA 转染试剂（原代免疫细胞）是一种基于脂质纳米粒 (LNP) 技术开发的即用型转染试剂，利用 LNP 特有的跨膜转运及逃逸机制可实现 RNA 的高效递送，适用于不同类型的 RNA 在人或鼠原代免疫细胞的转染。

MCE OptiLNP RNA 转染试剂（原代免疫细胞）具有如下优点：

1. 脂质纳米粒 (LNP) 技术：采用 LNP 载体，有效保护 RNA 免受递送过程中的降解和免疫系统清除的影响；

2. 高效的细胞内递送：LNP 特有的跨膜转运及逃逸机制，微量样品的包封率超过 80%，可实现 RNA 对原代免疫细胞的高效转染；

3. 适用范围广：适用于原代免疫细胞 RNA 的体外转染，支持多种 RNA 类型，如 siRNA、miRNA、gRNA、mRNA 等；

4. 操作简便：无需包封设备，仅需一步混合即可完成 RNA-LNP 包封并进行转染，且转染后无需更换新鲜培养基；

5. 生物相容性好：细胞毒性低，能较好平衡高转染效率与细胞活力，作用温和；

6. 安全：采用可降解脂质材料，确保安全性。

4℃，1 年

禁止冻结

人原代 T 细胞活化、培养参考方案

1. 细胞复苏

1) 温水浴解冻人原代 T 细胞冻存管进行细胞复苏，也可直接使用从外周血分离得到的人原代 T 细胞。

2) 加入完全培养基，置于培养箱中培养。

注：a. 原代 T 细胞培养中无血清培养基或含血清培养基均可选择。

b. 建议分离或解冻的 T 细胞立即进行活化处理。

2. 细胞活化、扩增培养

T 细胞计数，根据细胞量加入适量的人 CD3/CD28 T 细胞激活磁珠（MCE 货号：HY-K0353）进行活化、扩增培养。

注：a. 细胞活化也可使用 T 细胞激活剂。

b. 磁珠法 T 细胞活化方案可参考 T 细胞激活磁珠说明书进行操作。

c. T 细胞扩增时间可根据细胞量进行调整，一般建议活化 3 天后进行。

d. 细胞培养期间，可进行补液或半换液。

3. 表达水平检测

流式仪检测活化后 T 细胞表面 CD25 的表达水平。当 CD25 表达水平在 80% 以上时即可进行转染实验。

注：a. 使用 24 孔板建议细胞密度为 2 - 5 × 10⁵ 个/孔。其它培养孔板细胞量根据常规实验设计即可。

b. 建议细胞活化后一周内完成 RNA 转染实验。

1. 制备 RNA 预混液：参考下表 (1, 2) 用稀释缓冲液将 RNA 原液进行稀释。RNA 终浓度 40 ng/μL 或 siRNA 终浓度 3 pmol/μL。

2. 制备 RNA-LNP 复合物：参考表 1、2。直接取等体积转染试剂与 RNA 预混液混合，用移液枪吹打 20 次以上使其充分混匀。

3. 制备转染增强剂溶液：将转染增强剂冻干粉用 PBS (1×) 复溶配制成 1 μg/μL 转染增强剂溶液。

注：转染试剂增强剂溶液 -20℃ 可保存 3 个月，避免反复冻融。

按比例将 RNA-LNP 复合物与转染增强剂溶液加入细胞中，轻柔混匀，置于培养箱中继续培养。

转染细胞培养 24 - 48 h 后，可使用荧光检测法、Western Blot、ELISA、流式细胞术、报告基因等检测转染效果，或进行后续功能实验。

1. 本品经过 0.22 μm 滤膜过滤。

2. 转染增强剂为冻干粉，开盖前请先离心。

3. 为了获得较高的转染效率，RNA 原液建议使用无酶灭菌水，其他类型的溶剂对转染效率可能会有影响。

4. 建议 RNA 浓度：mRNA > 200 ng/μL，短链 RNA > 100 ng/μL，siRNA > 10 μM。

5. 建议制备 RNA 预混液使用试剂盒配套的稀释缓冲液稀释 RNA 原液。

6. 建议 RNA 预混液浓度为 40 ng/μL。如果涉及多种 RNA 共转染，则 RNA 预混液浓度为各种 RNA 浓度之和。如：CRISPR Cas9 mRNA 与 gRNA 共转染，RNA 预混液浓度为 Cas9 mRNA 浓度 + gRNA 浓度，Cas9 mRNA (μg) 与 gRNA (μg) 的推荐用量比为1:1 - 1:2。

7. 常见的短链 RNA （如 siRNA）若无特殊修饰，通常 1 nmol 的质量在 13 - 15 μg 之间，准确质量可结合具体核酸序列及修饰情况进行计算。

8. RNA/LNP 比例是 LNP 包封的关键，如需调整转染每孔 RNA 用量，可按比例调整加入细胞的每孔 RNA-LNP 复合物的体积。

9. RNA-LNP 复合物室温可稳定保存 8 h，请勿将 RNA-LNP 复合物置于冷冻条件。

10. 转染前后无需更换培养基，含血清、双抗的完全培养基对转染效果无明显影响。

11. 转染后 6 h 可按细胞常规培养流程进行换液或其他操作。

12. 细胞状态会极大影响转染效率，建议使用生长状态良好的细胞进行转染。

13. 影响转染效率的因素有很多，如细胞类型、细胞状态及密度、核酸质量及浓度、转染试剂与核酸比例等，建议先做预实验摸索最佳转染条件。

14. 为避免 RNA 酶污染，整个实验过程使用无 RNA 酶和无热原性的材料，如离心管、枪头等。

15. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

16. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。