Organoid Vitality Assay Kit 

类器官活细胞活力分析试剂盒

MCE 类器官活细胞活力分析试剂盒是一种基于荧光检测的类器官专用细胞活力检测试剂盒。

检测原理为：类器官活细胞中的代谢还原酶可以将试剂盒中的蓝色弱荧光染料还原为红色强荧光产物，而死细胞由于失去代谢能力无法还原染料，不会产生荧光信号。体系中的荧光信号强度与活细胞数量成正比，通过荧光强度分析类器官活力。

MCE 类器官活细胞活力分析试剂盒具有如下优点

1. 即用型：无需消化、裂解细胞及类器官

2. 操作简便：检测前后无需洗涤操作

3. 成本低：基于荧光法的检测原理，无需准备黑色透明的细胞培养孔板

4. 灵敏度高：线性范围宽，每孔最少可检测 100 个细胞，最短检测时间仅需 30 min

5. 数据可靠：类器官专用活力检测缓冲液可确保类器官在活性检测过程中保持稳定，提高数据的可靠性

6. 适用范围广：荧光染料无毒且不影响细胞的正常代谢和基因表达，可连续监测细胞及类器官的生长状态

-20℃，2 年

避光保存，避免反复冻融

根据培养孔板类型，配制类器官活力检测工作液 (1×)。

注：如检测常规细胞活力则可用细胞完全培养基替代类器官活力检测液稀释活细胞荧光染料。

连续检测类器官活力（以 96 孔板为例）

1. 96 孔板准备：取出待检测的 96 孔细胞培养板，吸弃去待检测孔中的原有完全培养基。

注：尽可能彻底吸净原有培养基可以避免原有培养基进一步稀释染料，同时可以避免类器官产生的代谢物和培养基组分残留影响染色效果。

2. 加入检测工作液：沿孔壁每孔加入 100 μL 类器官活力检测工作液 (1×)，并设置无类器官有染料的培养孔作为染料阴性对照孔。置于培养箱中孵育 30 - 120 min。

注：a. 当培养空中存在细胞或类器官时，工作液颜色会由蓝色变为粉红色。

b. 若细胞数量较少，孵育 30 - 120 min 后工作液可能仍为蓝色，肉眼观察粉色不明显一般不影响基于荧光信号的检测结果，可继续实验。

3. 检测荧光：用荧光酶标仪 (Ex/Em = 560/590 nm) 检测荧光，记录荧光强度。

4. 更换培养基：检查结束后，吸弃 96 孔板中的工作液，重新加入新鲜的完全培养基，继续培养 2 天。

5. 重复检测：重复以上类器官活力检测步骤 (1 - 3)。

注：一般情况下，正常生长状态下的类器官细胞活力会随着培养时间的延长而增加。以检测的总荧光值为例，每隔 2 天检测总荧光强度应增加 20% 以上。

6. 分析相对活力根据总荧光强度（扣除染料阴性对照）分析类器官的相对活力。

药敏实验检测类器官活力（以 96 孔板为例）

提前用类器官完全培养基配制不同浓度的药物。

1. 收集类器官并使用类器官消化液（MCE 货号：HY-K6013）将类器官消化为单细胞，96 孔板每孔（3 - 5 μL 基质胶）铺板 3000 个细胞，培养 2 天，使单细胞重新形成类器官。

2. 取出待检测的 96 孔细胞培养板，吸弃去待检测孔中的原有完全培养基。

注：尽可能彻底吸净原有培养基可以避免原有培养基进一步稀释染料，同时可以避免类器官产生的代谢物和培养基组分残留影响染色效果。

3. 沿孔壁每孔加入 100 μL 类器官活力检测工作液 (1×)，并设置无类器官有染料的培养孔作为染料阴性对照孔。置于培养箱中孵育 30 - 120 min。

注：a. 当培养空中存在细胞或类器官时，工作液颜色会由蓝色变为粉红色。

b. 若细胞数量较少，孵育 30 - 120 min 后工作液可能仍为蓝色，肉眼观察粉色不明显一般不影响基于荧光信号的检测结果，可继续实验。

4. 用荧光酶标仪 (Ex/Em = 560/590 nm) 检测检测，记录荧光强度。

5. 检查结束后，吸弃 96 孔板中的工作液，进行不同浓度的药物加药处理，并设置药物阴性对照组，每孔至少 3 个复孔。继续培养 3 - 5 天。

6. 重复以上类器官活力检测步骤 (2 - 4)。

注：加药前后检测的孵育时间应保持一致。

7. 根据总荧光强度（扣除染料和药物的阴性对照）分析类器官的相对活力。

8. 药敏实验类器官相对活力计算。

1. 本产品为无菌产品，应注意无菌操作，建议分装储存，避免污染。

2. 设置合适的细胞密度可以提高检测灵敏度。对于 96 孔板，建议每孔接种细胞数量在 100 - 100,000 个之间。

3. 检测过程中影尽量避免阳光直射，实验室白光灯影响不大。

4. 检测孵育时间可根据细胞浓度调整。建议试用酶标仪从孔板底部进行检测，避免孔板盖上的水汽和孔板上方的书写标记影响检测读数。

5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。