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CDK4-CCND2 蛋白, Human (sf9, GST, Flag, His)

目录号: HY-P702683
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蛋白溶液储存

实验小贴士

CDK4 蛋白在细胞周期蛋白 D-CDK4 复合物中充当 Ser/Thr 激酶，通过磷酸化和抑制 RB 家族成员来严格调节 G(1)/S 转变。这种活性，特别是早期 G(1) 期 RB1 的低磷酸化，释放 E2F 并促进驱动 G(1) 进展的基因转录。CDK4-CCND2 蛋白, Human (sf9, GST, Flag, His) 是重组的 CDK4-CCND2 蛋白，由 Sf9 insect cells 表达，带有 N-His, N-GST, N-Flag 标签。CDK4-CCND2 蛋白, Human (sf9, GST, Flag, His)

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描述

CDK4 protein, acting as a Ser/Thr kinase in the cyclin D-CDK4 complex, critically regulates the G(1)/S transition by phosphorylating and inhibiting RB family members. This activity, specifically hypophosphorylation of RB1 during early G(1) phase, releases E2F and promotes transcription of genes that drive G(1) progression. CDK4-CCND2 Protein, Human (sf9, GST, Flag, His) is the recombinant human-derived CDK4-CCND2, expressed by Sf9 insect cells , with N-His, N-GST, N-Flag labeled tag. ,
研究背景

CDK4 蛋白作为细胞周期蛋白 D-CDK4 (DC) 复合物中的 Ser/Thr 激酶成分，协调属于视网膜母细胞瘤 (RB) 蛋白家族成员（包括 RB1）的磷酸化和抑制。这种调节活动对于控制 G(1)/S 转变期间的细胞周期至关重要。RB1 的磷酸化会引发转录因子 E2F 从 RB/E2F 复合物中解离，促进 E2F 靶基因的后续转录，从而驱动进展通过 G(1) 期。特别值得注意的是 RB1 的低磷酸化发生在早期 G(1) 期。作为多种有丝分裂和抗有丝分裂信号的重要整合者，细胞周期蛋白 D-CDK4 复合物在细胞周期调节中发挥着核心作用。此外，CDK4 蛋白表现出以细胞周期依赖性方式磷酸化 SMAD3 的能力，从而抑制其转录活性。CDK4是细胞周期蛋白D/CDK4/CDKN1B三元复合物的重要组成部分，对于细胞周期蛋白D-CDK4复合物的核转位和活性是不可或缺的。
种属

Human
表达系统

Sf9 insect cells
标签

N-His;N-GST;N-Flag
蛋白编号

P11802-1 (M1-E303)&P30279-1 (E2-L289)
基因 ID

1019&894
中文名
CDK4-CCND2 蛋白
同用名
CDK4; cyclin-dependent kinase 4; PSK J3; cell division protein kinase 4; CMM3; PSK-J3; MGC14458;
分子量

60.3 kDa&36 kDa
纯度

Greater than 90% as determined by reducing SDS-PAGE.
内毒素含量

<1 EU/μg, determined by LAL method.
文件资料
Data Sheet (490 KB) 产品使用指南 (1213 KB)

CDK4-CCND2 Protein, Human (sf9, GST, Flag, His) 相关分类

Help & FAQs
  • siRNA 产品怎么判断转染效率？

    可以通过检测转染了 FAM 标记阴性对照的细胞的荧光信号来确定转染效率。通过转染了 GAPDH 阳性对照的细胞确认转染实验中操作是否有问题。如果 GAPDH mRNA 表达降低，则证明转染实验中操作没有问题，GAPDH siRNA 正常发挥作用。如果 GAPDH mRNA 表达没有变化，则证明操作出现失误，转染失败。

  • 使用你们的 siRNA 为什么转染过程中细胞出现大量死亡？

    可能原因有：1）转染试剂浓度过高会产生细胞毒性。2）转染时的培养基中加入了抗生素，这会降低细胞转染的效率，甚至导致细胞死亡。3）转染之后细胞本身状态不佳。

  • 购买了你们的 siRNA，有推荐的转染试剂吗？

    MCE 推出最新转染试剂 HY-K2017 (siRNA/miRNA Transfection Reagent)，可用于高效率转染 siRNA。对于一些难转染的细胞如原代细胞、干细胞和 B 细胞系，也可以考虑选择电穿孔法。

  • 如何产品改善基因沉默的效果？

    提高转染效率：首先可依据转染试剂说明书进行转染条件 (细胞密度，转染试剂用量，转染时间等)：优化 siRNA 浓度：siRNA 最佳工作浓度因不同的细胞类型及研究目的而异，这取决于 siRNA，细胞系和选择的分析方法。推荐 siRNA 工作浓度为 50 nM，也可以使用不同的浓度进行优化实验以达到最佳转染效率。但过高浓度的 siRNA 可能对细胞产生毒性。调整细胞的生长状态：细胞生长状态不好会影响转染效率。其次可尝试在其他细胞类型上进行转染。若由于实验模型限制无法使用其他细胞，可考虑更换转染试剂或转染方法 (如电转)。若优化之后提高转染效率（转染效率 80% 以上）还是无法改善敲低效果，则可以找我们重新免费设计 siRNA。

  • 同样的 siRNA 为什么在细胞 A 中有效，在细胞 B 效果不好？

    不同细胞可能转染效率不一样，基因表达水平也不一样，这些都与 siRNA 的作用效率有关。

  • 如果设置 FAM 阴性对照组是不是就可以不用做不带荧光的阴性对照呢？另外 GAPDH 的阳性对照只能通过 WB 和 qPCR 检测吗？可以通过流式检测其表达吗？

    我们三保一的套装中阴性对照有两个，一个是带 FAM 的，另一个是不带 FAM，带 FAM 的可以通过在荧光纤维镜下看是否转染进细胞了，建议都做。关于检测阳性对照，一般建议 qPCR 检测，因为我们的 siRNA 主要针对的是 mRNA，蛋白的检测周期的话会有差异，另外对比不同的靶标，转录本可能也会有差异，对蛋白的影响可能会有差异。

  • 复溶计算器

  • 重组蛋白稀释计算器

  • 比活力计算器

The reconstitution calculator equation

Volume (to add to vial) = Mass (in vial) ÷ Desired Reconstitution Concentration

Volume (to add to vial) = Mass (in vial) ÷ Desired Reconstitution Concentration
= ÷

The dilution calculator equation

Concentration (start) × Volume (start) = Concentration (final) × Volume (final)

This equation is commonly abbreviated as: C1V1 = C2V2

浓度 (start) × 体积 (start) = 浓度 (final) × 体积 (final)
× = ×
C1   V1   C2   V2

The specific activity calculator equation

Specific Activity (Unit/mg) = 106 ÷ Biological Activity (ED50)

Specific Activity (Unit/mg) = 106 ÷ Biological Activity (ED50)
Unit/mg = 106 ÷ ng/mL

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