CEACAM6 蛋白, Human (320a.a, HEK293, His)

可以通过检测转染了 FAM 标记阴性对照的细胞的荧光信号来确定转染效率。通过转染了 GAPDH 阳性对照的细胞确认转染实验中操作是否有问题。如果 GAPDH mRNA 表达降低，则证明转染实验中操作没有问题，GAPDH siRNA 正常发挥作用。如果 GAPDH mRNA 表达没有变化，则证明操作出现失误，转染失败。

可能原因有：1）转染试剂浓度过高会产生细胞毒性。2）转染时的培养基中加入了抗生素，这会降低细胞转染的效率，甚至导致细胞死亡。3）转染之后细胞本身状态不佳。

MCE 推出最新转染试剂 HY-K2017 (siRNA/miRNA Transfection Reagent)，可用于高效率转染 siRNA。对于一些难转染的细胞如原代细胞、干细胞和 B 细胞系，也可以考虑选择电穿孔法。

提高转染效率：首先可依据转染试剂说明书进行转染条件 (细胞密度，转染试剂用量，转染时间等)：优化 siRNA 浓度：siRNA 最佳工作浓度因不同的细胞类型及研究目的而异，这取决于 siRNA，细胞系和选择的分析方法。推荐 siRNA 工作浓度为 50 nM，也可以使用不同的浓度进行优化实验以达到最佳转染效率。但过高浓度的 siRNA 可能对细胞产生毒性。调整细胞的生长状态：细胞生长状态不好会影响转染效率。其次可尝试在其他细胞类型上进行转染。若由于实验模型限制无法使用其他细胞，可考虑更换转染试剂或转染方法 (如电转)。若优化之后提高转染效率（转染效率 80% 以上）还是无法改善敲低效果，则可以找我们重新免费设计 siRNA。

不同细胞可能转染效率不一样，基因表达水平也不一样，这些都与 siRNA 的作用效率有关。

我们三保一的套装中阴性对照有两个，一个是带 FAM 的，另一个是不带 FAM，带 FAM 的可以通过在荧光纤维镜下看是否转染进细胞了，建议都做。关于检测阳性对照，一般建议 qPCR 检测，因为我们的 siRNA 主要针对的是 mRNA，蛋白的检测周期的话会有差异，另外对比不同的靶标，转录本可能也会有差异，对蛋白的影响可能会有差异。