2. 技术支持

Technical Support

Hotline:400-820-3792

E-mail:tech@MedChemExpress.cn

产品指南

包装内有哪些物品？

包装盒，泡沫保温盒，装箱单，蓝冰 (或低温盒) ，化合物产品。打开包装后，请确认以上物品是否齐全，如有缺失，请致电 021-38924433，售后人员会及时给予处理。

产品说明书和质检报告等资料如何获取？

A、发货后， MCE 会将产品说明书和质检报告以电子版形式发送至您的邮箱。 B、可以在官网 (www.MedChemExpress.cn) 相关产品的详情页面中下载。 C、可致电 021-38924433，或发送邮件至 sales@MedChemExpress.cn 向客服人员索取。

收到货物后，包装内的蓝冰 (或低温盒) 已化，是否会导致产品变质？

MCE 的大部分产品在室温环境中都是稳定的，包装内的低温盒是为了预防运输过程中可能出现的极端温度情况。因此当您收到产品时，若蓝冰 (或低温盒) 已化，并不会影响其质量，请放心使用。对于一些特殊的、对外在条件比较敏感的化合物产品，我们会在产品发出时做额外的包装处理，确保质量。

产品的储存条件是什么？

产品 COA 上会明确标明具体的储存条件及注意事项。

以下是一些 常规 抑制剂产品的储存方法：

固体粉末： -20°C 3年
  4°C 2年
溶液： -80°C 半年
  -20°C 1个月 (超过一个月建议复检, 以免影响活性)

对于特殊产品，请参照 COA 中该产品的储存条件。

产品配制或使用前需要怎样处理？

在产品运输过程中，粉末或溶液可能会附着到管壁或管盖上。所以，建议开封前使用离心机低速离心，从而减少产品的损失。

如何将产品配成储备液？

可以根据实验需求，选择合适的溶剂制备储备液。

溶解度信息可在 MCE 官网产品详情页查询，目前我们只提供产品在 DMSO 和/或水中的溶解度，如需在其它溶剂中的溶解度，请发送邮件至技术支持邮箱 tech@MedChemExpress.cn 咨询。若未在产品页面中找到溶解度信 息，或出现难溶情况，可以采用水浴加热或者超声震荡的方式辅助溶解，也可通过邮箱 tech@MedChemExpress.cn 咨询 MCE 技术人员。

DMSO > A mg/mL DMSO 易溶 (A mg 可溶于 1 mL DMSO，饱和度未知)
H2O < B mg/mL H2O 不溶或难溶
DMSO < C mg/mL DMSO 难溶 (C mg 难溶于 1 mL DMSO 中)

推荐使用 MCE 官网的摩尔计算器进行计算
www.MedChemExpress.cn/Molarity Calculator.htm

储备液配制完成后建议分装成多管分别冻存，避免使用过程中反复冻融造成的产品失活。

在细胞实验中产品应该如何稀释？

用 ddH2O 作为溶剂配制的母液，可以直接用培养基稀释到所需的工作液浓度。

用 DMSO 作为溶剂配制的母液，在稀释时要确保工作液中 DMSO 的终浓度尽量在 0.1% 以下，最高不要超过 0.5% ，并设置相应浓度的 DMSO 对照组。 稀释过程建议分段进行，避免浓度变化过快导致化合物析出。若稀释过程中出现化合物析出的情况， 可采用超声的方法使其复溶。

在动物实验中如何使用产品 (如给药途径、剂量、溶剂以及给药周期等) ？

用 ddH2O 配制的母液，可以直接用生理盐水或 PBS 缓冲液稀释到实验所需的浓度。

用 DMSO 配制的母液，也可以用生理盐水或 PBS 稀释，为减少对动物的毒性，建议 DMSO 的终浓度不要大于 2% 。有些产品在水中的溶解度很低，DMSO 配制的母液在稀释过程中可能出现析出的情况，可以通过添加助溶剂来帮助溶解，比如 Tween80 、甘油、羧甲基纤维素钠和 PEG400 等。悬浊液可用于口服和腹腔注射，不会影响产品活性。如需帮助，请发送邮件至技术支持邮箱 tech@MedChemExpress.cn 咨询。

在产品详情页面会提供文献中使用的溶解和给药的方式，并不是 MCE 实际测得的结果，不保证其有效性，仅供参考。

Administration volumes considered good practice (and possible maximal dose volumes):

Species Route and volumes (mL/kg)
Oral s.c. i.p. i.m. i.v. (bolus) i.v. (slow inj.)
Mouse 10 (50) 10 (40) 20 (80) 0.05 (0.1) 5 (25)
Rat 10 (40) 5 (10) 10 (20) 0.1 (0.2) 5 (20)
Rabbit 10 (15) 1 (2) 5 (20) 0.25 (0.5) 2 (10)
Dog 5 (15) 1 (2) 1 (20) 0.25 (0.5) 2.5 (5)

Conversion of different model animals based on BSA:

Species Weight (kg) Body Surface Area (m2) Km factor
Dog 10 0.5 20
Rabbit 1.8 0.15 12
Guinea pig 0.4 0.05 8
Rat 0.15 0.025 6
Hamster 0.08 0.02 5
Mouse 0.02 0.007 3
Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by   Animal B Km
Animal A Km

产品是否无菌？

MCE 液体产品多用 DMSO 配制，由于 DMSO 本身具有极强的杀菌力，配制好的溶液为无菌溶液，只需保持操作环境及仪器无菌即可。若确实需要除菌，建议使用细菌过滤器，切勿高温高压灭菌。

重组蛋白 相关 FAQ

  • 重组蛋白是怎么获得的？

    应用基因重组技术，获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体，将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。

  • 重组蛋白如何运输？

    MCE 的大部分重组蛋白产品为冻干粉，在室温环境中都是稳定的，一般采用蓝冰或是室温运输。

  • 我收到的重组蛋白产品，啥也没看到，空空如也？

    冻干的体积大小受冻干前缓冲液组分、盐离子浓度、产品浓度等影响。由于工艺原因，蛋白冻干粉产品会呈现粉末状或肉眼不易观察到的透明薄膜状、胶冻状、雪花状，这些都是正常现象。此外，在运输过程中，冻干颗粒可能会分散，并粘附于瓶壁和瓶盖，肉眼无法清楚看到。收到产品后，请先离心，再按照冻干粉的重溶建议步骤，使用合适的缓冲液，重溶至说明书推荐的浓度，然后进行分装储存及使用。

  • 重组蛋白纯度和浓度怎么测定？

    常用的重组蛋白纯度测定方法： a. SDS-PAGE 测定法； b. HPLC 测定法； c. 银染测定 法。
    常规的重组蛋白浓度测定方法： a. Bradford 蛋白定量测定法； b. BCA 蛋白定量测定法； c. SDS-PAGE 蛋白定量测定法。

  • 重组蛋白复溶与保存如何操作？

    1）冻干粉在运输过程中，会因为外力的因素粘附于管壁或者管盖上面，在开盖之前，先通过离心操作，将冻干粉收集于管底，避免损失很浪费。开盖前快速离心10000-12000rpm，30s；若没有高速离心机，3000-3500rpm 离心 5min。
    2）离心之后，向冻干粉中加入提供的复溶 Buffer，用枪头轻轻吹打混匀，重悬至浓度不低于100 μg/mL。注：分装冻存时，蛋白浓度不低于 100 ug/mL，且每管的体积不可小于 20 μL。
    3）用复溶Buffer直接溶解的细胞因子或重组蛋白液体可在 2-8℃ 最长保存1周。对于周期较短的实验，可以直接取该条件下保存的重组蛋白溶液加入到培养体系内即可，待一周之内用完。若要长期保存，则需用含载体蛋白 (0.1% BSA、5% HAS、10% FBS 或 5% 海藻糖) 的溶液进一步稀释，然后分装冻存与 -20℃ 至 -80℃。
    4）保存产品时请避免反复冻融。反复冻融，冰晶会破坏重组蛋白的空间结构，导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变，从而降低抗体的结合能力，也加快了蛋白的降解速度。

  • 长期保存重组蛋白溶液时，为什么要加载体蛋白？

    因为塑料管壁对蛋白有很好的吸附作用，会导致重组蛋白粘附在管壁不易分离，进而导致溶液中重组蛋白的实际浓度偏低，最终导致其活性下降。而载体蛋白可以预先封闭塑料管壁上蛋白结合位点，使细胞因子或者重组蛋白不会粘附于管壁。因此长期保存，在分装冻存前，一定要用含载体蛋白的溶液进一步稀释，至浓度不低于 100 μg/mL，因大量的载体蛋白可以保证低浓度的细胞因子或者重组蛋白仍然维持较高的稳定性。

  • 复溶缓冲液，可否随意更换？

    不建议，按照复溶方法进行复溶。-------复溶方法提供的缓冲液均已实测。

  • 能否用涡旋震荡仪帮助冻干粉充分溶解？

    对于重组蛋白来说，具有一定空间结构才能使活性最佳。溶解过程中，不可用涡旋震荡仪快速震荡，否则会影响细胞因子的活性。建议用枪头轻轻吹打混匀或者上下轻轻颠倒混匀即可。

  • ED50 数据和比活性数据U单位怎么换算？

    ED50 (Median effective dose) 为半数有效浓度，指的是可诱导50% 最大反应的细胞因子浓度。一个活性单位是每毫升具有最大响应作用 50% 的细胞因子的数量， 1个ED50相当于1 unit。如某种细胞因子或蛋白的ED50为1ng/mL，那么 1mg (1x106 ng) 的细胞因子或蛋白中应含1x106/1 = 106units.

  • 不同种属重组蛋白是否能交叉使用？

    重组蛋白的种属交叉活性需要根据具体产品而定；建议尽量选择对应种属的重组蛋白。如实在无法匹配种属，以下信息供参考：
    a . 大多数人细胞因子对小鼠细胞有效 (仅少数例外)。
    b . 多数小鼠细胞因子对人细胞有效，但特异性可能不强。如小鼠的表皮生长因子 (EGF) 对人的表皮细胞有活性，对人的其他种类细胞可能也有作用。
    c . 干扰素、GM-CSF、IL-3、IL-4 具有种属特异性，即重组人的这些细胞因子只能作用于人细胞，对小鼠和大鼠等其他种而重组小鼠的这些细胞因子也仅用于小鼠，对人的细胞无效。
    d. 成纤维细胞生长因子 (FGFs)、神经营养素 (Neurotrophins，如 BDNGF、GDNF、 CNTF、β-NGF 等)、TGF-β 等高度保守，各种属间交叉活性强。

  • 蛋白标签有什么作用，实验时融合标签是否需要切除？

    重组蛋白的融合标签是指利用 DNA 体外重组技术，在目的蛋白 N 端或 C 端进行融合表达的特定蛋白、多肽或寡肽标签。重组蛋白通过融合标签与包被在固相基质上的特异配基结合，使重组蛋白定向固定并得以纯化，大大简化了重组蛋白的检测，同时既能保留天然蛋白的大部分结构，又能实现增加溶解度，防降解，促进分泌，便于纯化等功能。常用的标签有 His、GST、SUMO、Flag 和 Fc 等。若融合标签较小，免疫原性也很弱，一般不需要切除，对蛋白质的后续应用和研究不会产生影响，例如 His 标签、Fc 标签。但是有些大标签是需要切除的，例如：Dsb 蛋白、FkpA 蛋白、GST 蛋白、SUMO 标签等。

  • MCE 蛋白定制服务提供哪些蛋白表达系统？定制服务中如何选择合适的蛋白表达系统？

    MCE 能提供大肠杆菌表达系统、哺乳动物表达系统和酵母表达系统的定制蛋白服务。（更多定制服务相关）

多肽 相关 FAQ

  • 多肽提供的数据报告有哪些？

    通常我们会为每条多肽提供 MS、HPLC 及 COA 报告。

  • 多肽纯度和多肽含量分别指什么？

    多肽在生产过程中会带入杂质、水分和盐等物质，多肽纯度指目标多肽含量相对样品中全部肽成分的占比，不计入水分和盐等，通常通过 HPLC 分析法来检测；而多肽含量则是相对于产品中的非肽物质、水分、盐等而言，通常通过氮元素分析或氨基酸组分分析进行测定。

  • 如何计算多肽的实际使用量？

    由于多肽产品中中除杂质外，还含有盐和水份，可以先计算理论用量后，根据肽含量和纯度信息计算多肽的实际使用量：
    1. 先计算理论用量：Net weight = 浓度 * 体积 * MW (MW 表示游离态的分子量)
    2. 根据占比计算实际用量：Gross Weight = Net Weight÷(纯度百分比 * 肽含量百分比)

  • 你们提供定制多肽吗？如何下订单？

    MCE提供多肽定制服务，您可以在官网上提交您的需求，或者将您需要的产品信息 (多肽序列、含量、纯度、盐形式、修饰类型及位点等信息) 发送邮件至 sales@MedChemExpress.cn，或联系我们的销售同事，我们会尽快反馈信息给您。

  • 如何储存多肽？

    我们的多肽将以冻干粉的形式发出，如需长期储存，需要将多肽在 -20℃、避光、干燥条件下储存，-80℃ 更佳。含有 Met、Cys 或 Trp 等氨基酸的多肽容易氧化、应保存在无氧条件中。在使用多肽冻干粉之前，瓶或试管应在干燥环境中升至室温，防止开盖后水汽进入导致产品失效。

  • 如何溶解多肽？

    多肽的溶解比较复杂，其溶解度取决于其序列和修饰，我们建议在溶解所有多肽之前取少量肽进行溶解性测试。您可以先计算多肽的长度。一般来说，少于 6 个氨基酸的多肽可以溶于水。对于链长度超过 6 个氨基酸的多肽，溶解原则主要依照于其总电荷与疏水性：酸性氨基酸 Asp (D), Glu (E), 及 C 端-COOH 赋值 -1，碱性氨基酸 Arg (R), Lys (K), His (H), 及 N 端-NH2 赋值为 +1，其余氨基酸赋值为 0，你可以依据此计算多肽的总电荷。当总电荷为0时，可依次尝试用少量有机试剂、DMSO溶解多肽；当总电荷为正时，可依次尝试用蒸馏水、少量酸性溶液、DMSO 溶解多肽；当总电荷为负时，可依次尝试用蒸馏水、少量碱性溶液、DMSO 溶解多肽。建议使用无菌溶剂或将多肽容易过滤除菌后保存，更多信息您可以参考我们的多肽溶解建议。

  • 如何判断多肽结构的稳定性？

    多肽的稳定性主要由其结构序列决定，通常含有 Cys、Met 或 Trp 的多肽容易氧化，需要保存在无氧环境中；含有 Asn 或 Gln 的多肽容易降解，故到货后应尽快使用；含有 Asp、Glu、Lys、Arg、His 等氨基酸的多肽容易吸潮，应妥善保存。大部分多肽易吸潮而失效，故应将多肽冻干粉保存在干燥环境中，且避免反复冻融。

染料 相关 FAQ

  • 1. 染料孵育结束后在荧光显微镜没有荧光出现，什么原因？

    1）染料浓度过低；可适当增加染料浓度
    2）孵育时间过短，根据实际情况调整孵育时间
    3）荧光成像通道选择不当，确定染料具体激发/发射波长
    4）染料选择问题

  • 染料孵育结束后细胞死亡，怎么回事？

    1）部分染料终浓度过高会导致细胞死亡，根据实际情况调整染料使用浓度
    2）染料稀释方法不当，染料需先配制储存液，使用时需使用PBS等溶剂稀释到工作液浓度
    3）实验过程操作不当。

  • 流式实验染色与普通染色的区别在哪里？

    流式实验染色与普通染色在实验操作上面区别不大，两者染料使用浓度相同，需注意，贴壁细胞进行流式实验时，需消化处理。

  • 一些可以染动物细胞的染料，是否可以对细菌染色？

    不同菌种的染色情况不同，革兰氏阴性菌细胞壁厚约 10 nm，与细胞膜结合紧密，整体通透性较好，染液易于穿透进入到细胞膜，表现出较好的细胞膜轮廓，结构清晰完整。而革兰氏阳性菌由于细胞壁厚约20-80 nm，并且与细胞膜结合不紧密，染液不易穿透，因此细胞膜轮廓不清晰，不能完整的显示细胞结构。

  • 进行小动物活体成像时，选用生物发光法和荧光法的区别和优缺点是什么？

    图表

  • 肌丝蛋白染色时需注意什么？

    在固定样本时，应避免使用含有甲醇的固定液进行固定，甲醇会破坏肌丝蛋白结构。在使用时应注意。

  • 部分产品有AM 和无 AM 两种，区别在哪里？

    AM为乙酰甲氧基甲酯（AM）基团，具有疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。进入细胞后，染料上的AM被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子，从而滞留在细胞内，保留荧光强度。

  • 标记染料后面的官能团分别代表什么含义？

    1）NHS/SE：统指琥珀酰亚胺，用于标记抗体，蛋白质，肽，胺修饰的寡核苷酸和其他生物分子上的游离胺（-NHX）
    2）Maleimide：马来酰亚胺，用于标记抗体，蛋白质和肽上的巯基
    3）Tetrazine：Tetrazine-cyclooctene(TCO) 用于 PROTOC
    4）Azide/alkyne 叠氮化物-通过点击化学法标记亚乙基
    5）caprylic 酰肼-用于标记醛基和酮基
    6）RCOOH 羟酸：用于碳二亚胺预活化后标记胺，或用于醇类的 Steglich 酯化
    7）amine-用于标记各种亲电子化合物，例如活化的酯

  • 1. 细胞/组织已经做过抗体荧光标记，是否可以再用染料做其他标记

    可以，需注意染料激发/发射波长与抗体荧光波长不可重叠。同时染色时应该先染荧光抗体。

  • 对抗体/蛋白标记有什么特殊要求

    1）抗体/蛋白分子量不少于20kDa 2）避免使用含伯胺 (例如 Tris，甘氨酸) 或铵离子的缓冲液，它们与待标记蛋白竞争反应 3）低浓度的叠氮化钠 (≤3 mM 或 0.02％) 或硫柳汞 (≤0.02 mM 或 0.01％) 不会显著干扰蛋白标记；但是 20-50％ 的甘油会降低标记效率。

  • 蛋白/抗体标记与染料的用量比例在多少

    通常摩尔比在 1:10-1:20 之间，蛋白/抗体浓度不少于 1 mg/mL。

  • 染料的应该如何存放？

    在产品备注的储存温度条件下，以开封日起可存放一年。如果多次反复使用，建议使用 DMSO 进行溶解并分装，分装后可在 -80°C 保存数月不等。注意 DMSO 溶液稳定性较差，需要无水 DMSO 进行溶解，避免冻融循环。

  • 为什么溶解荧光素钠盐或者钾盐的时候需用不含Ca2+ 或 Mg2+ 离子的溶剂？

    Mg2+ 是催化荧光氧化的重要因素，Ca2+ 是和腔肠素氧化相关离子,缓冲液建议使用 DPBS 溶解效果最佳。

  • 使用H2DCFDA染色时，control组有明亮荧光怎么处理？

    H2DCFDA在进入细胞后会被细胞酯酶水解形成DCFH，再被氧化DCF，它的特异性很低，不只是ROS会让其氧化，随着时间的增加荧光亮度会增强与瞬时水解，空气氧化，光诱导，以及细胞的其它氧化反应有关，建议客户调整孵育时间和浓度，找到实验组和control组有明显变化的条件进行观察。

同位素标记物 相关 FAQ

  • 什么是同位素类化合物？

    在化合物的分子结构中含有同位素原子的化合物均称为同位素类化合物。

  • 同位素类化合物一般用途是什么？

    同位素类化合物一般均可用来做示踪和内标。

  • MCE 提供的所有同位素化合物都是稳定同位素化合物吗？

    是的，MCE 目前提供的同位素类化合物均为稳定同位素类化合物。

  • MCE 可以提供含有哪些稳定同位素原子的化合物？

    MCE可以提供含有不同稳定同位素原子的化合物，如含有氘 (2H， D )，碳-13 ( 13C )， 氮-15 ( 15N )，氧-17 和氧-18( 17O & 18O )等。

  • MCE 是否可以定制同位素类化合物呢？

    MCE 可以根据客户您的需求，定制含有不同同位素原子的化合物，具体的要根据您的需求来评估，如您所需求产品是含氘，碳-13，氮-15 等，需求产品含有几个同位素原子可以满足您的科研需求等，具体的产品具体定制。

  • MCE 提供的同位素类化合物都提供哪些检测数据确保化合物的质量标准呢？

    MCE提供的所有同位素类化合物均是经过严格的质量检测的，我们有完善的质量管理体系，所提供的同位素类化合物一般包含 COA 及化合物的具体检测数据，如 HNMR，LC/GC-MS，HPLC及Isotopic Enrichment 等。

  • 为什么同一个化合物会对应几个同位素化合物的货号？

    因为一个非同位素化合物可以含有不同同位素原子的化合物，还可含有同位素原子个数及位置不同等的同位素类化合物，所以一个化合物会有不同的同位素化合物。

  • MCE 提供的稳定同位素化合物是如何测定纯度和丰度的？

    MCE 提供的大多数同位素化合物纯度一般是用 HNMR，LC/GC-MS，HPLC 等检测的。 化合物的丰度一般是用 NMR 或 MS 检测。

  • MCE 提供的稳同位素化合物的含量是否均有测定？

    在 MCE 的 COA 报告里面是没有含量测定结果的。如果一些客户想要了解该化合物的准确含量，我们可以提供额外的收费检测服务如 TGA，Karl Fischer 等。

  • 为什么收到的同位素化合物外观和COA里面的描述的外观不一致呢？

    一些同位素类化合物会含有不同的盐形式（如盐酸盐，醋酸盐等），这些含盐的化合物很容易吸潮，虽然它们在保存及运输过程中也进行了保护措施如密封等。但这些仅属于一些物理上面的变化，化合物性质没有任何改变可正常使用。

  • 购买的同位素化合物的保存温度范围一般是多少呢？

    所有的同位素化合物的保存温度都在COA里面有说明，按照COA里面的温度保存即可。

  • 一些油状物质的化合物如何转移和称量？

    一般方法：小刮刀、 干净的空瓶、分析天平、手套 A) 空瓶在分析天平精确称量； B) 小刮刀放入样品瓶取样品并将其放入空瓶中，重复到空瓶中样品是所需重量。

生化试剂 相关 FAQ

  • 为什么同一 CAS 号会有多种名称不同的产品？

    有些产品的水合物、酸式盐等形式，依然会使用自由基的产品 CAS 进行标识，因此在选择产品时，建议除了要看产品名称，还要看产品的结构式。

  • 为什么同一种产品有多个 CAS 号？

    因为产品构型不同，如：手性、异构体等。

  • 化合物含盐的与不含盐的有什么区别？

    含盐与不含盐的形式，主要结构是同样的，在生物实验中起到的效果也是一样的，只是溶解度会有差异。

  • 看不见瓶中的产品怎么办？

    以小规格出售的产品可能不容易看见，因为产品可能粘附在瓶底或瓶壁。可先进行离心操作，在稳定化处理产品时，请确保溶剂与瓶中所有部分接触。

  • 收到产品后，包装内的冰盒已化，是否会导致产品变质？

    一些对温度比较敏感、不稳定的产品，我们会在产品发出时做额外的包装处理，以确保产品质量，且 MCE 保证发货时效，若您收到产品时，冰盒已化，大多数情况下并不会影响产品质量，可放心使用。若产品质量出现问题，可及时联系相关技术或销售进行处理。

  • 产品是否无菌？

    大部分产品并非无菌包装。若用于细胞/动物实验，请提前做好预处理。多数产品可以用 DMSO 溶解，或者提供 DMSO 溶液形式。DMSO 本身具有极强的抑菌作用，一般将溶于 DMSO 的试剂默认为无菌溶液，常规下按照无菌溶液操作即可。若您的实验需要严格无菌，建议使用 0.22 μm 以下的滤器进行过滤除菌，切忌高温高压灭菌，否则会对产品造成不可逆的影响。

  • 溶解产品时如何进行计算？

    质量浓度 (g/L) = 物质的量浓度 (mol/L) × 分子量 (g/mol)
    物质的量浓度 (mol/L) = 质量分数 × 密度 (g/L) / 分子量 (g/mol)
    质量 (g) = 浓度 (mol/L) × 体积 (L) × 分子量 (g/mol)
    原液体积 (mL) = 浓度 (mol/L) × 配制体积 (L) × 分子量 (g/mol) / 密度 (g/mL)
    MCE 官网首页左上角技术服务一栏配有稀释计算器/摩尔计算器的链接，客户可以直接登录使用。

  • 特殊产品需要特别注意哪些问题?

    对于油性化合物，制备储备液时须先加入 DMSO 溶解化合物，然后根据现有体积制备。不须称量化合物；对于不稳定化合物，制备储备液时须在瓶中加入氮气。

  • 怎样制备储备液？

    根据实验方案选择合适的溶剂制备储备液。通过 MCE 测定的溶解度信息会显示在网站的产品详情页面上。体外实验中，DMSO 是最常用的制备储备液的溶剂。储备液在使用前再稀释成工作液（如在细胞培养基中按 1:1000 稀释）。

  • 收到产品后如何处理?

    产品在运输过程中受到颠簸，可能会粘附在管壁或盖子上。因此收到产品后，切勿直接打开盖子，轻轻震动或 200-500 rpm 转速下离心，使产品降到管底后再打开使用。处理过程中，尽量避免产品损失或污染。

  • 产品在非工作时间送达，并放置在室温下，标签提示需要在 4℃ 或 -20℃ 保存，产品是否会变质?

    标签上的储存温度是长期保存的最优条件。大多数产品在室温下短期放置也是十分稳定的。

  • 说明书注明产品在特定浓度可以溶解，但还是没有完全溶解，怎么办?

    请把溶液加热到 37℃，并涡旋或超声几分钟，通常这样处理后化合物都能够完全溶解。如果这样还不能完全溶解，请联系我们技术支持获取更多的帮助。

  • 产品在 DMSO 中溶解的很好，但用水性溶剂稀释时有固体析出?

    这是正常现象，析出的固体在经过几分钟的涡旋、超声和水浴加热到 37℃ 后，可以重新溶解。使用前请确保沉淀已经完全溶解。

PCR 相关 FAQ

  • PCR 扩增效率低的原因：条带较弱或无扩增

    1） PCR 酶：PCR 酶对 DNA 具有一定的偏好性。PCR 条件优化后仍未得到预期条带，建议更换其他 PCR 酶。建议使用高保真酶。 2） 模板：模板纯度较低、降解严重或模板中含有较多抑制物时（如植物基因组模板）会影响扩增效率；在模板质量保证的前提下，建议对模板进行梯度稀释后扩增，摸索合适的模板用量。 3） 引物：引物本身设计不好或引物不特异。建议设计特异引物进行扩增，或者设计多对引物结合模板浓度进行梯度扩增以保证 PCR 效率。 4） 反应体系、反应条件：适当增加循环数、降低退火温度都可以提高扩增效率，但同时会导致特异性与保真性下降。可根据具体实验情况对 PCR 体系及条件进行优化。

  • MCE 的 PCR 扩增试剂盒产品间的区别是什么？

    HY-K0531 和HY-K0532 均包含溴酚蓝染料，PCR 之后可直接进行电泳；HY-K0533 不包含溴酚蓝染料，PCR 反应后需要加入 DNA loading buffer 方可进行电泳检测。HY-K0531 是普通的 PCR Mix，HY-K0532 能够快速扩增，扩增速度可达 15 sec/kb (1 kb 以内的极限扩增速度可达 5 sec/kb)，HY-K0533 是高保真 PCR 扩增预混液，有效扩增长达 10 kb 的目的片段，扩增速度可达 15 sec/kb。客户可根据具体实验需求选择该产品。

荧光定量 PCR 相关 FAQ

  • 无 Ct 值 (信号) 出现

    1）检测荧光信号的步骤有误：一般 SYBR Green 采用 72℃ 延伸时采集；
    2）引物或探针降解：可通过电泳检测其完整性；
    3）模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；
    4）模板降解：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

  • Ct 值出现过晚 (Ct>35/38)

    1）扩增效率低：反应条件不够优化。设计更好的引物或探针，适当降低退火温度等； 2）反应成分发生降解或加样量不足； 3）扩增产物太长，一般采用 80-250 bp 的产物长度。

  • qPCR 时融解曲线不止一个主峰

    1）引物设计未优化：避免引物二聚体和发夹结构的出现，避免正反引物退火温度差异太大； 2）引物浓度欠佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比； 3）模板有基因组的污染：RNA 提取过程中避免 gDNA 引入，或通过引物设计避免非特异扩增。

  • qPCR 时实验重复性不好

    1）样品未混合均匀；
    2）加样时，样品体积误差较大；
    3）加样时存在气泡；
    4）仪器温度均一性不好；
    5）模板浓度低。样品初始浓度越低，重复性越差，应减少样品的稀释倍数，或根据实际情况设置浓度梯度进而摸索最佳体系。

反转录试剂盒 相关 FAQ

  • MCE 有哪些反转录试剂盒产品？产品特点是什么？

    RT Master Mix for qPCR II (HY-K0510A) 是一款高效、快速的反转录试剂。本品为即用型预混液，含有反转录反应所需的所有组分，只需加入 RNA 和 RNase-free H2O 即可快速高效完成反转录反应。反转录产物 cDNA 可直接用于 PCR 或 real time quantitative PCR (qPCR)，与 MCE 提供的 qPCR 试剂盒配合使用即可进行高性能的基因表达分析。
    RT Master Mix for qPCR II (gDNA digester plus) (HY-K0511A) 与 K0510A 相比，增加了 gDNA digester，可去除 RNA 模板中的 gDNA 污染。

  • 如何消除 gDNA 对 PCR 扩增的影响？

    1）在引物设计时避免 gDNA 扩增； 2）在提取 Total RNA 后使用 gDNA digester 处理以除去 gDNA； 3）选购 RT Master Mix for qPCR (gDNA digester plus) (HY-K0511A) 试剂盒，可消除 gDNA 对后续实验的影响。

  • 为什么 RNA 反转录产物用电泳观察不到？

    反转录产物是从模板反转录而获得，而模板的量本身比较低，反转录的量通常还要少于模板量，并且 RNA 的反转录产物大小很不均匀，因此通常 RNA 的反转录产物直接电泳观察是观察不到的。具体实验中，建议实验材料及提取的 RNA 保存不宜过久。

核酸提取与纯化 相关 FAQ

  • 洗脱 DNA/RNA 离心柱堵塞

    1） 裂解或匀浆处理不彻底。减少样品使用量，增加裂解液用量，增加匀浆和裂解时间； 2） 过柱上清液不够澄清。

  • 提取 DNA 时，为什么 A260/A280 的比值较低？

    用水作为洗脱液时，比值会偏低。

  • 提取 DNA 时，为什么 A260/A280 的比值较高？

    大量 RNA 残留导致，原因可能是没有使用 RNase A，或 RNase A 活性下降。

  • 影响质粒提取的因素有哪些？

    质粒提取的得率和质量与很多因素有关，如宿主菌的种类和培养条件、细菌细胞的裂解、质粒拷贝数、质粒的稳定性、抗生素、吸附膜的吸附能力、提取操作的熟练程度等等。

  • 未提出质粒或质粒得率较低？

    1）大肠杆菌老化；2）质粒拷贝数低；3）菌体中无质粒；4）碱裂解不充分 5）吸附柱过载；6）质粒未全部溶解；7）乙醇残留；8）洗脱液加入位置不正确；9）洗脱液体积过小；10）洗脱时间过短

  • 如何评价 RNA 的质量？

    提取 RNA 的质量可从以下两个方面进行评估：
    1) 浓度和纯度。RNA 具有连续的吸光谱，其在 260 nm 处具有最高吸收峰；蛋白在 280 nm 处有最大吸收峰；230 nm 处的吸光度可反映乙醇、GTC、GuHCl、EDTA 等的含量。因此，在 RNA 的质检参数中，260、280 和 230 nm 下的吸光度分别代表了核酸、蛋白质及有机溶剂等的值。一般情况下，RNA 纯度检测时我们大都只看其在 OD260/OD280 比例中的数值范围，少量的蛋白、盐或基因组等污染我们是可以接受的。
    2) 完整度评估。mRNA 约占总 RNA 的 3%，rRNA 约占总 RNA 的 80% 以上。一般可通过凝胶电泳对 RNA (主要是 rRNA) 的完整性进行评估。以真核生物举例：完整的总 RNA 电泳后会产生 28S、18S、5.8S 的 rRNA 条带，28S 与 18S 的条带强度大致比例应为 2:1；电泳条带 5.8S rRNA 出现则表示有轻微降解。RNA 本身易降解，一般在实验中，5.8S 条带出现很正常，但如果只有 5.8S 条带且有明显弥散现象，则表示降解较为严重；若在 28S 以上出现多余的条带，可能存在 gDNA 污染；若在点样孔中存在明显条带，表示存在蛋白污染。

细胞裂解 相关 FAQ

  • 细胞、组织的常见裂解方法

    裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解 (包括 SDS 和溶菌酶处理等) 通常是比较温和的方法，通常很少使 DNA 断裂，是提取、纯化 DNA 的常用方法。机械裂解 (包括反复冻融法、超声法等) 可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成 DNA 的断裂。

  • RIPA 裂解细胞、组织的原理是什么？

    RIPA 裂解属于化学裂解法，其裂解原理为：
    1) 利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；
    2) 溶解蛋白；
    3) 蛋白变性使其稳定；
    4) 抑制蛋白酶活性。

  • RIPA 裂解液 (强) 的组分及其作用分别是什么？

    50 mM Tris-HCl pH 7.4 (缓冲体系)，150 mM NaCl (等渗体系)，1% Triton x-100 (破坏细胞)，1% Sodium deoxycholate (中度变性剂和蛋白溶解剂)，0.1% SDS (强变性剂和蛋白溶解剂)，EDTA (变性剂和稳定剂) 等。RIPA 裂解液 (强) 不含全面的蛋白酶或磷酸酶抑制剂。为有效的防止蛋白降解，建议添加全面的蛋白酶和磷酸酶抑制剂。

  • RIPA 裂解后所得蛋白样品的浓度该如何测定？

    RIPA 裂解液 (强) 由于含有较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度，可选用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒。

蛋白酶抑制剂 Cocktail 相关 FAQ

  • 蛋白酶抑制剂 cocktail 片剂 HY-K0011 和溶液装 HY-K0010 比较

    HY-K0010：液体包装，溶剂是 DMSO，含量 1%；有效成分较 HY-K0011 更多，效果更好；如果靶蛋白是组织蛋白酶 D 等蛋白，本产品会有更好的保护效果。 HY-K0011：片剂，溶剂为 ddH2O，保存更方便；有效期为两年，而 HY-K0010 的有效期为一年。

  • 制作蛋白酶抑制剂 cocktail 片剂 (HY-K0011) 的辅料会不会影响实验？

    不会。该片剂采用了优化配方，溶解迅速，不产生气泡，溶解后完全澄清透明。可以兼容各种生命科学实验，包括蛋白结晶和 Co-IP 等高要求实验。

  • 蛋白酶抑制剂 cocktail 中 AEBSF 和 PMSF 的区别

    PMSF 是以前常用的蛋白酶抑制剂，毒性大，只针对丝氨酸蛋白酶，保护单一；蛋白酶抑制剂 cocktail 中的 AEBSF 是 PMSF 的替代品，毒性低 (AEBSF 的半致死量是 2834 mg/kg，而 PMSF 是 200 mg/kg)，更稳定 (PMSF 水溶液中的半衰期是 30 min，在细胞裂解过程中很容易失效)；该蛋白酶抑制剂 cocktail 组分还包含 Aprotinin，Bestatin，E-64 和 Leupeptin，针对不同的蛋白酶亚型，能起到全面，长效的保护。

磷酸酶抑制剂 Cocktail 相关 FAQ

  • HY-K0021、HY-K0022、HY-K0023，3 个磷酸酶抑制剂 cocktail 的区别

    3 个磷酸酶抑制剂，HY-K0021 和 HY-K0023 为三种天然化合物的组合，溶剂为 DMSO，HY-K0022 为五种无机盐的组合，溶剂为水；HY-K0021 和 HY-K0023 相差一种组分，针对 L 型碱性磷酸酶，HY-K0023 比 HY-K0021 效果更好；HY-K0021 和 HY-K0023 均为 HY-K0022 的有效补充，使用时应选择 HY-K0022 者组合：HY-K0021 和 HY-K0022 组合/HY-K0022 和 HY-K0023 组合，可以单独使用，但不推荐。

  • 为什么不将 HY-K0021 和 HY-K0022，HY-K0022 和 HY-K0023 一起分别做一个更大的 cocktail？

    由化合物自身的性质决定，HY-K0021/HY-K0023 的化合物和 HY-K0022 的盐类混合，会产生沉淀，该沉淀主要是析出的盐类，沉淀会同时影响盐类和天然化合物的效果。并且无法完全重新溶解。

磁力架 相关 FAQ

  • MCE 磁力架可以通用于各种磁珠吗？

    磁力架依据磁性分离原理分离磁珠，适用于各类磁珠。

  • MCE 磁力架适用于哪些规格的离心管？

    200 μL-2 mL-15 mL 离心管都适用。

  • MCE 磁力架的长宽高各是多少？

    长 222 mm，宽 62.4 mm，高 35 mm。

  • 磁力架的高斯值是多少？高斯和特斯拉如何换算？

    3000-3500 高斯。 1 特斯拉等于 10,000 高斯。

  • 如何清洁磁力架？

    可使用以下任一种试剂喷洗或擦拭磁力架：70% 异丙醇/1% 次氯酸钠/0.1 N HCl。磁力架不使用时请置于阴凉干燥处保存。

磁珠 相关 FAQ

  • 磁珠可以离心吗？

    磁珠不能离心。离心可能会导致磁珠发生不可逆聚集，大大降低结合能力。

  • 磁珠可以冷冻保存吗？

    磁珠不能冷冻或干燥，请于 4℃ 保存，禁止冻结。

  • 磁珠是无菌的吗？

    不是。

  • 磁珠能否回收利用？

    磁珠不建议重复使用。

  • 磁珠可以超声处理吗？

    一般来说，在加入配体包被磁珠时，短时间超声是减少磁珠聚集、确保磁珠获得最佳均一性的好方法。一旦目标分子与磁珠孵育结合后，就不建议超声，以防结合被破坏。链霉亲和素磁珠本身能够承受超声。超声 5 分钟是可以的，更长时间超声的影响还未被测试。关于链霉亲和素-生物素的相互作用可否被超声破坏目前也尚无相关信息。

  • 如何确定磁珠的偶联效率？

    可以通过光密度 (OD) 检测、荧光标记和放射性标记等。

  • 标签蛋白能否用 Protein A/G 磁珠拉取？

    可以。如需纯化 Flag 标签蛋白，可以将 Flag 抗体与 Protein A/G 磁珠孵育，再孵育含 Flag 标签蛋白的抗原样本。

  • Protein A/G、Protein A、Protein G、Protein L 磁珠该如何选择？

    不同亲和纯化配体对不同抗体的结合能力不同，应依据抗体类型选择合适的配体，详情可见说明书附件表格。

  • 如何提高抗体与 Protein A/G 磁珠的结合效率？

    磁珠与抗体的结合效率与抗体的种类与亚型有关。首先需根据抗体类型选择合适的磁珠，若亲和力较低，可适当延长磁珠与抗体的孵育时间 (30-120 min)、增加结合缓冲液 pH (pH 8-9)、降低离子浓度 (25-100 mM NaCl)。

  • 如何提高磁珠在免疫沉淀反应中的特异性？

    可以先将抗体与样品进行孵育，形成抗体-抗原复合物，再用 Protein A/G 磁珠捕获复合物；也可先对抗原样本进行预处理 (抗原样本与磁珠先进行孵育，去除非特异性结合蛋白)，再将抗原与抗体、磁珠孵育。

  • 如何解决磁珠易粘附管壁的现象？

    建议使用低吸附率的耗材进行磁珠操作。 另外，在缓冲液中添加 0.01%~0.1% (v/v) 的非离子型去垢剂 (如 NP-40、Tween-20 或 Triton X-100) 可以有效降低磁珠对耗材的粘附。

  • 磁珠能否与连二亚硫酸盐、DTT、EDTA 兼容？

    连二亚硫酸盐是一种还原剂。此外，连二亚硫酸盐离子对二价和三价金属离子 (M2+、M3+) 的亲和力很强，使之能够增强铁的溶解度，因此可作为一种有效的螯合剂。但是磁珠中的铁会被连二亚硫酸盐还原并脱离。如果磁珠暴露于 DTT 和 EDTA，也会出现相同的情况。因此，连二亚硫酸盐、DTT 和 EDTA 不能与磁珠兼容。

  • 裂解液和蛋白酶抑制剂如何使用？

    MCE 蛋白酶抑制剂 (HY-K0010) 为 100× 溶液，建议每 1 mL 细胞裂解液中加入 10 μL 蛋白酶抑制剂。

  • 阴性对照 lgG 组后续 WB 有条带一般是什么原因？

    首先需要排除 lgG 和后续 WB 一抗同源导致的轻重链的干扰条带 (25 kd 和 50 kd 附近)；其次对抗原样品预处理 (将抗原样品单独与 Protein A/G 磁珠或同型对照抗体结合)，可减少部分非特异性结合；也可能是 lgG 的问题，可以换用其他品牌 lgG 尝试。

  • 检测结果条带背景过高？

    A. 可能是由于蛋白非特异性结合到抗体、磁珠或 EP 管上，建议对裂解液进行预处理，去除非特异结合的蛋白；在最后一次洗涤前，转移整个样品到新的 EP 管中，然后磁性分离或离心分离。
    B. 洗涤效果不佳，也会导致条带较高的背景，建议增加洗涤时间与次数。

  • 检测结果无条带？

    A. 标签融合蛋白没有表达可能导致检测结果无条带，建议操作：a. 确保目的蛋白带有相应融合标签；b. 制备新鲜的裂解液；c. 使用恰当的蛋白酶抑制剂 (如 MCE 的产品：HY-K0010，HY-K0011)。
    B. 孵育时间不足可能导致检测结果无条带，建议延长孵育时间。
    C. 裂解液中存在高浓度的 DTT、2-巯基乙醇或其他的还原剂等干扰物质，建议选用合适的裂解液。

  • 链霉亲和素磁珠的结合能力为多少？

    1 mg 链霉亲和素磁珠通常可结合 2400 pmol 游离生物素、60 μg 生物素化抗体、1600 pmol 生物素化单链寡核苷酸。

  • 如何检测生物素化核酸与链霉亲和素磁珠的结合？

    可通过检测上清液中未结合的核酸量，得到与链霉亲和素磁珠结合的核酸量。通过 OD 检测或凝胶电泳可获知核酸浓度。也可以对核酸进行放射性标记以直接在磁珠上检测核酸浓度，或通过荧光标记核酸而在上清液中检测浓度。

  • 链霉亲和素磁珠是无 RNase 的吗？

    不是。当进行 RNA 实验时，应使用 DEPC 处理的 0.1 M NaOH/0.05 M NaCl 溶液清洗磁珠 2 次，每次 1-3 分钟。清洗后，可使用 DEPC 处理的 0.1 M NaCl 溶液重悬磁珠。注：“DEPC 处理”是指：加入 0.1% DEPC，混合，室温下孵育 1 小时。随后，将 DEPC 处理后的溶液进行高压灭菌。

  • 如何从链霉亲和素磁珠上解离生物素化分子？

    链霉亲和素-生物素相互作用是已知最强的蛋白与其他分子间非共价的生物相互作用。生物素与链霉亲和素间的键形成非常迅速，一旦形成，就不会受到 pH、温度、有机溶剂和其他变性剂等多种极端因素的影响。
    生物素化核酸：在 pH 8.2 的 95% 甲酰胺 + 10 mM EDTA 中孵育磁珠，65℃ 孵育 5 分钟或 90°C 孵育 2 分钟，磁性分离后收集上清。Holmberg 等 (Electrophoresis 26, 501-510, 2005) 报道称，在用离子水短时间孵育后，也可将生物素化 DNA 从链霉亲和素磁珠上释放。
    生物素化蛋白质：在 0.1% SDS 或 SDS-PAGE 缓冲液中煮沸 3 分钟，磁性分离后收集上清。

蛋白 Marker 相关 FAQ

  • 电泳条带模糊的原因

    1）电压过高或电泳时间过长，产热过多导致电泳缓冲液温度升高； 2）电泳缓冲液重复使用多次，建议更换新配置的电泳缓冲液，为了获得理想的实验结果建议在使用前预冷缓冲液； 3）分离胶的浓度偏低，建议使用合适的胶浓度； 4）凝胶放置时间过长，建议使用新配制的凝胶。

  • 为什么有时候电泳带型不整齐？

    1）建议点样时将蛋白 Marker 放在泳道中间。如在凝胶两侧泳道，由于边缘效应、离子强度不均等原因，均会导致带型变宽或弯曲； 2）凝胶配制不匀，凝胶内存有气泡，或点样孔中有细碎的残胶。

  • 电泳时蛋白 Marker 条带分离不明显？

    1） 大多为胶浓度不合适，建议在推荐的凝胶浓度范围内使用； 2） 建议更换新配置的电泳缓冲液。

  • 预染 Marker 电泳后清晰，但是转膜后颜色很浅

    1）转膜时一定要将胶和膜压紧，否则条带会在转膜过程中丢失或变浅； 2）转膜条件不适合，建议 200 mA、2 小时，或 100 mA 过夜转膜。

  • Marker 曝光后杂带很多是什么原因？

    1） Marker 上样量过多或曝光时间过长，可适当减少上样量或曝光时间； 2） 二抗的浓度过高或特异性和纯度不高，也会造成杂带较多的结果。

化学显色 相关 FAQ

  • 特超敏 ECL 发光试剂盒检测限度是多少？

    本产品的组分配比经过多次优化，对抗原的最低检测限可达到中飞克级，在 WB 实验中，一抗 (1 mg/mL) 储存液可稀释 1:1,000 至 1:50,000 倍，二抗 (1 mg/mL) 储存液可稀释 1:50,000 至 1:200,000 倍。

  • MCE 特超敏 ECL 发光试剂盒的特点

    1) 灵敏。使用适当的一抗和二抗时，可在硝化纤维膜或 PVDF 膜上检测丰度为中飞克级的蛋白条带；
    2) 持久。优化条件下，可检测的光信号发光持久；
    3) 适应性强。样本信号的可检测范围跨度大 (fg/pg/ng)；
    4) 信号明亮。通过胶片或成像系统进行曝光，易于捕获图像；
    5) 高信噪比。样品信号强，而背景光弱。

  • 膜与特超敏 ECL 工作液孵育后，出现褐色条带或者条带出现空心

    检测体系中 HRP 含量过高，底物消耗过快，导致过曝或空心。通常是由于样品中目的蛋白含量非常高、上样量过高、一抗或二抗用量过大、ECL 类试剂的检测灵敏度过高等导致。

  • 胶片出现高背景

    抗体浓度过高、洗涤不充分、封闭不充分、ECL 类试剂过于灵敏、曝光过度、实验操作失误如膜干了、膜表面被接触或刮擦等。

  • 特超敏 ECL 试剂暴露在实验室照明下会失效吗？

    实验室常见照明不会损害 ECL 工作液，但曝露于日光或强光下时间过久，敏度会降低。

细胞增殖与毒性检测 相关 FAQ

  • CCK-8 和 XTT、MTS 相比，有什么优势？

    三者生成的甲臜都是水溶性的。 1）CCK-8 产物的水溶性更好； 2）CCK-8 的原料 MST-8 是新型专利化合物，比 XTT 和 MTS 更稳定，因此 CCK-8 的实验结果更加可靠； 3）CCK-8 对细胞无毒，但 XTT 和 MTS 对细胞都有弱毒性。

  • CCK-8 可以检测悬浮细胞吗？

    可以。与检测贴壁细胞的步骤一样，可参考说明书，并根据个人实验情况进行适当调整。悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。
    (注：血液细胞形成的 Formazan 很少，需要较长的显色时间，一般为 5-6 小时。)

  • CCK-8 做出来的结果平行性不好是什么原因？

    1）建议在实验过程中使用排枪操作，保证每孔铺板细胞数目一致，所加试剂量一致； 2）边缘孔在培养箱里面的蒸发情况比较严重，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的 PBS、水或培养液； 3）可以把 96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解边缘蒸发对实验产生的影响。

  • CCK-8 检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂会干扰检测，那该如何确定待测溶液是否具有还原性呢？

    将不含细胞的待测溶液孔中加入 10 μL CCK-8 溶液，孵育 1-4 h 后，测定在 450 nm 处的空白吸光度。若测得的吸光度很小，则说明含有较少的还原剂，正式实验可以直接加入 CCK-8 进行检测；若测得的吸光度相对较大，则说明存在较多还原剂，正式实验时需去除培养基，将细胞洗涤两次后，再加入新的培养基和 10 μL CCK-8 溶液。

  • 培养基中含有酚红会对最终的实验结果有影响吗？

    培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

细胞凋亡与细胞周期检测 相关 FAQ

  • Annexin V 法检测原理？

    在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸 (Phosphatidylserine, PS) 位于细胞膜内侧；细胞凋亡早期，PS 会外翻到细胞膜外侧。Annexin V (膜联蛋白 V) 是一种 Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，可与 PS 特异性结合，因此 Annexin V 常作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。Annexin V 经 FITC 标记后可发绿色荧光，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。此外，本试剂盒中的碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 染色液是一种不能穿透细胞膜的红色荧光染料，可对凋亡晚期细胞及坏死细胞染色。

  • 处理贴壁细胞有啥注意事项？

    对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤；PI 摄入过多，消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 Annexin V-FITC 的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇使胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA，EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。

  • Annexin V/ PI 凋亡检测的试剂盒能否检测人以外其他动物的细胞凋亡情况？

    可以。因为 Annexin V 是与磷脂酰丝氨酸 (PS) 亲和，而 PS 在不同种属间没差异。在正常细胞中，PS 只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，PS 由脂膜内侧翻向外侧。

  • 贴壁细胞可以先染PI 然后再消化下来吗？这样是否可以减小由于消化液造成的细胞膜破损而染上的PI 的误差？

    先加PI 不仅染色是否每组都均匀充分很难判断，而且PI 本身对细胞也是有毒性的，对实验结果影响会比胰酶大，不建议这样做。

  • 为什么只能用不含EDTA 的胰酶消化贴壁细胞，用含EDTA 的胰酶消化细胞对结果有什么影响？

    因为Annexin V 是Ca 依赖的蛋白，所以不能加入EDTA，防止EDTA 螯合了Ca 离子从而影响Annexin V，进而影响结果。 用胰酶消化贴壁细胞后务必用血清终止消化反应。

  • 有些厂家说明书 Annexin V 和 PI 一起加？为什么你们先加 Annexin V 后加 PI？

    用流式检测凋亡时，PI 受时间的影响很大，因标记了 PI 后会加大细胞毒性，随着时间延长会导致 PI 的染色增加，特别是检测早期凋亡时，如果时间延长除了会导致在流式细胞仪上的细胞分群差距加大外，误差会明显加大。一般 PI 加上后立刻上机，然后在一个小时内检测完成。两种方法都可以，但是按照我们操作步骤造成的误差会更小。

  • HY-K1070 细胞凋亡与坏死检测试剂盒可以用来区分早期凋亡和晚期凋亡吗？

    不能区分。

  • HY-K1071 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒既可以检测细胞周期，又可以检测细胞凋亡？

    本试剂盒主要用于检测细胞周期，凋亡细胞会出现 sub-G1 峰。专门的凋亡分析建议选择其他试剂盒，如 HY-K1070/HY-K1073/HY-K1078 等。

  • HY-K1072 细胞凋亡检测试剂盒 (Hoechst 法) 可用于定量计算凋亡率吗？

    不建议。主要做定性观察。

  • 做细胞周期实验是否需要不染色的空白对照？

    做细胞周期实验一般是不需要设置不染色的空白对照的。

  • 若细胞转染了带红色荧光的质粒，还适合用 PI 染料？

    PI 染料为红色荧光，所以不适合，会有干扰。

  • 进行细胞凋亡实验时，需要避光操作吗？

    MCE 细胞凋亡系列试剂盒主要都借助染料，染料都存在荧光淬灭的情况，因此操作时建议避光，并尽可能的缩短实验时间，同时可以搭配 HY-K1042，抗荧光淬灭封片液

虚拟筛选 相关 FAQ

  • 什么是虚拟筛选 (virtual screening, VS)

    使用计算机模拟技术作为基础，针对特定靶标生物大分子的三维结构或定量构效关系(QSAR)模型，从现有小分子化合物数据库中，搜寻与靶标生物大分子结合或符合QSAR模型的化合物，而后进行实验筛选研究。虚拟筛选为当前新药研发的常规步骤，是高通量筛选的有效补充。

  • 虚拟筛选的优势有哪些

    利用小分子化合物与药物靶标间的分子对接运算，虚拟筛选可快速从几十至上百万分子中，遴选出具有成药性的活性化合物，大大降低实验筛选化合物数量，周期短、成本低、阳性率高。

  • 虚拟筛选分为哪几类

    虚拟筛选方法主要分为基于受体生物大分子结构的虚拟筛选 (structure-based virtual screening, SBVS)和基于配体小分子的虚拟筛选 (ligand-based virtual screening, LBVS)两种。 基于受体的虚拟筛选即基于分子对接的虚拟筛选，是根据实验测定的或同源模建的受体生物大分子的三维结构，通过分子对接的方法，确定小分子与受体的结合构象，根据与结合能相关的亲合性打分函数对蛋白和小分子化合物的结合能力进行评价，最终从大量的化合物分子中挑选出结合模式比较合理的、预测得分较高的化合物，用于后续的生物活性测试。 基于配体的虚拟筛选即基于药效团模型的虚拟筛选，是根据现有药物的结构、理化性质和活性关系的分析，建立定量构效关系或药效基团模型，预测筛选新化合物的活性。

  • 虚拟筛选的关键因素有哪些？

    准确测定或预测靶标蛋白质的分子结构、精确和快速地计算候选化合物与靶标相互作用的自由能变化是进行虚拟药物筛选的关键，也是限制虚拟筛选准确性的瓶颈。

  • MCE服务内容包括哪些

    靶点调研、分子化合物库制备、分子对接筛选/药效团建模及筛选、人工筛选以及理想实体化合物的代购等。

  • 虚拟筛选阳性率高吗

    据报道虚拟筛选的阳性率为5%-30%。利用虚拟筛选成功辅助药物设计的案例逐年增多，虚拟筛选已成为目前最有潜力的药物开发工具。

  • 筛选得到的化合物可以在市面上买到吗

    MCE 网页上展示的虚拟筛选化合物库，除 HY-L0093V 国家化合物库外，其他均为实体化合物库。化合物购买分为 MCE 品牌化合物购买和国外化合物代购购买，MCE 品牌化合物购买货期是1周，国外化合物代购购买货期是4-5周。一般情况下，实体化合物库中的化合物均可购买到，个别热销产品或者滞留化合物会存在缺货情况，这种化合物可以进行定制。

  • 虚拟筛选提供的项目报告结果有哪些

    一般情况下，分别提供筛选的每个化合物库排名前200名化合物结构式及相关化合物信息（三个文件：SDF、PDF、EXCEL），提供综合排名前 5 名化合物与靶蛋白的对接模式图 (2D/3D图)，以及PDF项目报告文件（报告包含靶蛋白背景调研、筛选流程、5个优选化合物对接模式分析等）。

  • 我们目前使用一种软件吗？是否会用几种软件同时筛选，然后综合几个软件给出最终结果？

    针对不同的虚拟筛选分别用薛定谔或discovery studio软件，最终作图用的是PyMol软件。出于时间和成本考虑，一般只会用一种软件进行筛选。

  • 筛选流程/周期

    虚拟筛选过程包括前期调研、化合物数据库的准备、蛋白结构的准备、分子对接运算/药效团建模等，我们一接到订单，会马上展开调研、启动项目，软件评选与人工挑选结合选择化合物的方法稍微费一些时间，但可以保证模拟筛选到的结果是比较好的。具体的筛选时间由项目难易程度决定，有的快一些有的慢一些，都是为了给客户提供一个最优结果。

抗体抑制剂 相关 FAQ

  • 抗体抑制剂是什么？

    MCE 的抗体抑制剂指科研用（biosimilar）抗体药物或叫治疗性抗体，一般是已上市或进入临床的针对某种疾病（靶标）的抗体，本质还是抗体而且是单克隆抗体。作用和小分子药物（小分子抑制剂）类似，因此取名抗体抑制剂。区别于一般的一抗、二抗。

  • 什么是抗体？抗体有什么用？

    抗体（免疫球蛋白，Immunoglobulin，Ig）是存在于体液内和淋巴细胞表面具有特殊化学结构和免疫功能的球蛋白，由 B 细胞产生的大型 Y 形糖蛋白。抗体与抗原（靶蛋白）发生特异性结合：可以直接使抗原失活；使抗原被对应细胞吞噬破坏；弱化抗原表面，从而易受补体破坏。

  • 抗体有哪些类型？

    抗体以一个或多个 Y 形单体存在，每个 Y 形单体包含两条相同的重链（H）和两条相同的轻链（L）。Y 形单体的顶部包含可变区（V），也称抗原结合片段（F(ab)）区，包含抗原结合区。 根据轻重链不同，抗体有多种分类。抗体重链 Fc 区域的特异性序列决定了抗体类型，如 α-IgA、δ-IgD、ε-IgE、γ-IgG、μ-IgM。轻链则有两种类型，分别为 λ 型和 κ 型。

  • 抗体抑制剂的种属有哪些？

    我们目前上线的一般为已上市或进入临床的针对某种疾病（靶标）的抗体，抗体种属一般是人。细分的话，有3种类型： 1) 嵌合型抗体（chimeric antibody）：将异源抗体的可变区与人源抗体的恒定区结合，如人-鼠抗体。>65% 人源氨基酸序列。 2) 人源化抗体（humanized antibody，CDR移植抗体）：用人源框架区替代鼠源框架区，仅保留了3个鼠源性CDR，其他为人源结构。>90% 人源氨基酸序列。对抗体进行改造，保留亲本鼠单抗的亲和力和特异性，又降低了其异源性，有利应用于人体。 3) 人源抗体 （human antibody）：全人源序列。 无论是哪种类型，做动物实验时，适用于裸鼠、免疫缺陷鼠等人源化小鼠/人源化动物模型。

  • 什么是同型对照抗体？如何选择？

    同型对照是没有特异靶标的一抗，用于抗体药物作用和体内/体外单抗研究的阴性对照（种属、亚型、剂量等相同）。例如Adalimumab（HY-P9908）的抗体类型为 Human IgG1，我们就可以选择Human IgG1 kappa, Isotype Control（HY-P99001）作为其同型对照抗体，选择原则为种属、亚型一致。

天然产物 相关 FAQ

  • 天然产物的划分依据是什么？

    如果产品可以在文献中找到特定的来源信息，则应将其归类为天然产物。

  • 天然产物常用的检测仪器有哪些？

    核磁共振波谱（NMR）和质谱（MS）以及高效液相色谱（HPLC）或气相色谱（GC） 。

  • MCE 所有的天然产物都是天然来源吗？

    不是的，有些产品是合成的。

  • MCE 是否提供天然产物的定制服务？

    是的，MCE 将评估客户的定制需求并给出相应回复。

抗体偶联药物 相关 FAQ

  • ADC（Antibody-Drug Conjugate）提供的数据报告有哪些？

    ADC 产品的 CoA 中包括 SEC-HPLC，HIC-DAR，Endotoxin，Free-drug 等检测数据。

  • ADC 中辅料有什么作用？

    ADC 中辅料的作用包括增强稳定性、提高生物利用度和促进药物递送。辅料在储存和使用期间保持药品的完整性方面发挥着至关重要的作用。

  • ADC 中的辅料是否影响纯度?

    ADC 中的辅料并不影响纯度，也不会对药效产生影响。

  • 如何溶解 ADC？

    ADC 固体粉末中含有辅料，建议收到产品后一次性全部溶解，分装成小规格保存，避免反复冻融。

  • 定制 ADC 需要提供哪些信息?

    需要确认使用的抗体 （纯度、亚型、分子量、消光系数、等电点等），linker 和 payload 信息。此外，还需确认终产物 ADC 的浓度、纯度、DAR 值和制备量等信息。

寡核苷酸 相关 FAQ

  • 寡核苷酸是通过什么方法合成的？

    亚磷酰胺三酯合成法是广泛使用的寡核苷酸合成方法。该方法是将亚磷酰胺单体固定在固相载体上完成核酸链的合成，合成方向是由序列的 3’ 端向 5’ 端进行，相邻的核苷酸通过磷酸酯键连接。

  • 寡核苷酸含量是通过什么方法测定的？

    寡核苷酸的含量通常通过紫外吸收光度法（UV-Vis）进行测定。寡核苷酸的含量是相对于产品中的非核酸物质、水分、盐等而言，所以通过紫外吸收光度法测定的寡核苷酸的含量通常与称重质量不一致。建议客户根据紫外吸收光度法测定的含量将粉末全部溶解，然后分装成小规格保存，避免称重分装。如果订购量较多，可以联系我们备注需要预分装成多管。

  • 寡核苷酸的运输条件是什么？

    MCE 提供的寡核苷酸产品为冻干粉，在室温环境中都是稳定的，一般采用蓝冰或是室温运输。

  • 寡核苷酸的储存条件是什么？

    收到产品后，请于 -20℃ 保存。注意防潮，冻干粉可以稳定保存一年

  • 如何制备寡核苷酸的储备液?

    MCE 提供的寡核苷酸产品为冻干粉形式。冻干粉会呈现粉末状或肉眼不易观察到的透明薄膜状、胶冻状、雪花状。此外，在运输过程中，冻干颗粒可能会分散，并粘附于瓶壁和瓶盖，肉眼无法清楚看到。请在使用前瞬时离心，用合适的缓冲液（如无菌水或无核酸酶水）配制成储备液，分装后保存于 -80℃，避免反复冻融。荧光标记的寡核苷酸需要避光保存和操作。

  • 你们提供定制寡核苷酸吗？如何下订单？

    MCE 提供寡核苷酸定制服务，您可以将相关信息，包括：序列、纯度、化学修饰类型 （锁核酸 (LNA)、Phosphorthioate (PS)、2’-F、2’-OMe、2’-MOE、 或 Cy3、Cy5 和 FAM 标记）等。） 和修饰位置等信息发送邮件至 sales@MedChemExpress.cn，或者直接联系我们的销售，我们会尽快反馈信息给您。（更多定制服务相关）

标准品 相关 FAQ

  • 对于相同CAS产品，货号带“R”和不带“R”的产品有什么区别，比如HY- B0141R和B0141？

    货号不带“R”产品属于分析级别生物试剂，可以用于产品定性及活性测试。货号带“R”产品属于分析标准品，可以提供准确的含量信息，可以用于含量分析，仪器矫正等。

  • 你们可以提供LC/MS分析的标准品吗？

    是的，MCE可以提供多种标准品，每种产品均在 ISO17025 体系下进行检测，并附有全面的分析文件以证明产品纯度，含量及结构，可进行计量溯源。我们采用多种检测方式（HPLC、 GC、MS、NMR 等）进行结构鉴定及纯度鉴定，同时采用 TGA（热重分析）、LOD（干燥失重）、KF（水分测定）或 ROI（炽灼残渣测定）等方式进行干燥失重、溶残、水分含量、灼烧残渣等杂质含量测定，采用质量平衡法进行含量计算。

  • 你们提供的标准品属于有证标准物质吗？

    MCE提供的标准品为分析标准品，不属于有证标准物质，但可以提供详细的析文件以证明产品纯度，含量及结构，可进行计量溯源。

  • 你们是否可以提供标准品定制服务？

    是的，我们可以提供标准品定制服务，所以标准品检测均在ISO17025体系下进行。

化合物库 相关 FAQ

  • 化合物库提供的资料信息有哪些？

    A. 纸质化合物排布信息：包含的化合物排布具体信息。
    B. U 盘：包含以下三个文件
    1. Excel 文件：包含化合物库的排布信息，理化信息和相关生物学信息等。
    2. PDF 文件：可视化的化合物库排布信息。
    3. SDF 文件：含有每个化合物对应的结构信息。

  • 化合物库的提供形式是怎么样的？

    化合物库的产品以溶液和粉末两种形式提供。其中溶液产品主要以10 mM 提供，产品溶解度不足 10 mM 的化合物以 2 mM 提供，部分分子量不确定的化合物 （eg：聚合物、混合物等等）以 3mg/mL 的浓度来提供。
    大部分溶液产品以 DMSO 为溶剂，少量在 DMSO 中溶解度不足 2 mM 的产品会根据实测溶解度用水或者乙醇溶解。

  • 化合物库以什么包装形式提供？

    粉末产品：只能选择 96 孔冻存管。
    溶液产品：96/384 孔板或 96 孔冻存管。

  • 如何储存化合物库，保质期是多久？

    化合物库建议依照使用情况储藏在 -80℃ 或 -20℃ 条件下。自收货之日起，-80℃可储藏两年，-20℃可储藏一年。
    如果购买大体积化合物库，收货后可先分装，减少反复冻融对化合物活性的影响。

  • 你们提供定制化合物库吗？

    MCE 可提供高度定制化的化合物库，包括化合物库产品的种类，提供形式（粉末或溶液），排布，规格，以及包装（孔板或冻存管）。对于 MCE 已有的化合物库，您可以从中删减不需要的化合物，或增加感兴趣的化合物。您也可以提供您的具体诉求，会有专业人员为您匹配相对应的化合物。

酶 相关 FAQ

  • 不同公司的酶是否可以进行单位换算？

    不同公司/不同货号的同一种酶，只有在酶活检测方法完全一致的前提下，才能考虑换算，如果检测方法不一致则无法直接进行换算。

  • 购买的酶以酶活单位包装，如何计算其中的蛋白/固体质量？

    产品规格中的100U代表产品的总活力为100个单位，具体的单位定义以及酶活数据一般会写在产品的质检报告（COA）中，您可以根据所购产品的批号在官网下载对应的检测报告，并查看具体检测数值。
    计算产品重量，分为以下两种情况：
    1）酶活单位为U/mg protein
    例如HY-P2804 #277748这个批次的产品，其酶活检测结果为104 U/mg protein ，即每毫克蛋白的活力为104个单位，则100U对应的蛋白质量为100÷104≈0.96 mg。同时该批次产品检测的蛋白含量为96%，即总固体质量中有96%为蛋白质量，因此您收到的这瓶产品总的固体质量为0.96÷0.96≈1 mg。
    2)酶活单位为U/mg soid
    例如HY-P2802 #293739 这个批次的产品，其酶活检测结果为50.5 U/mg solid ，即每毫克固体的活力为50.5个单位，则100U对应的固体质量为100÷50.5≈1.98 mg。

  • 酶产品怎么溶解？

    1）网站页面展示了“溶解性数据”的产品，参考官网溶解数据，此数据为我们的实测数据，提供质量保证；
    2）部分产品在网站页面/Data sheet中会有相关溶解性的信息，这部分信息来自于文献，可作为参考；
    3）如以上方法都未能找到您所需要的信息，建议您前期先少量尝试用蒸馏水溶解，或按照自己的实验内容，自行参考文献查找溶解方案，先进行摸索性实验，来帮助您获得产品的溶解度信息。

  • 酶产品溶解之后如何保存？

    溶解后建议短期储存于2-8℃，这样做是为了避免冻融对酶活产生影响。若想要长期储存，建议根据单次实验量分装后于-20℃储存。

  • 酶溶解后有沉淀或毛絮？

    1）溶剂选择不当：在某些情况下，溶剂选择不当也可能导致酶溶解后出现沉淀或毛絮。例如，有机溶剂的加入可能降低溶剂的介电常数，增大溶质分子间的静电引力，导致酶分子凝集沉淀。
    2）溶解的pH/温度不当：酶作为具有催化作用的蛋白质，其稳定性受pH值和温度的影响。当其偏离最适范围时，酶可能发生变性，导致溶解度降低，进而形成沉淀或毛絮。
    3）溶液中盐浓度过高：盐浓度过高会降低蛋白的溶解度，使蛋白质从溶液中析出。
    4）纯度较低：部分天然提取的酶类产品由于工艺等方面原因，为粗酶形式提供，其中含有一些未完全去除的杂质，此时溶解可能会存在不溶性物质。 5）加入了不溶性保护剂：部分酶类产品易失活，故在生产过程中添加了保护剂，目的是维持稳定的活性。
    6）固定化酶：固定化酶不溶于水，可直接加入反应体系中使用。
    若溶解后有沉淀/毛絮，
    1）可优先考虑选择的溶剂、pH、温度是否合适；
    2）若溶解条件均合适，可以尝试加蒸馏水稀释；
    3）若加蒸馏水稀释仍无变化，建议您在不影响实验的情况下，直接取上清液尝试进行实验。如需去除，可使用滤纸过滤。

抗体 相关 FAQ

  • 抗体“应用”一栏的缩写词都代表什么？

    缩写 英文名称 中文名称
    WBWestern Blot蛋白质免疫印迹
    IHC-PImmunohistochemistry-Paraffin石蜡切片样本的免疫组织化学
    IHC-FImmunohistochemistry-Frozen冰冻切片样本的免疫组织化学
    ICC/IFImmunocytochemistry/Immunofluorescence细胞免疫荧光
    mIHCMultiplex Immunohistochemical多重荧光免疫组化
    IPImmunoprecipitation免疫沉淀
    ChIPChromatin Immunoprecipitation染色质免疫沉淀
    FCFlow Cytometry流式细胞术
    ELISAEnzyme Linked Immunosorbent Assay酶联免疫吸附试验

  • 抗体应该如何保存？

    大多数抗体需在-20℃保存，建议收到产品后进行离心、分装，避免产品反复冻融。部分抗体是4℃保存，具体请参照产品说明书。

  • 如何选择一抗？

    一抗的选择需满足以下三要素：
    （1）目的蛋白：确认研究的目的蛋白名称（核对 Gene ID、UniProt ID）
    （2）反应种属：抗体的反应种属（Reactivity）要包含待测样本的种属
    （3）应用：确认抗体说明书上的应用（Application）包含待做的实验

  • 如何选择二抗？

    （1）种属来源：根据一抗种属来源进行选择；如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（宿主来源于羊、兔等均可）
    （2）标记物的选择：根据实验类型不同，来选择二抗的偶联标记。
    常用标记类型如下：
    a. WB/ELISA: 酶标（HRP/AP）/ 生物素标记 / 荧光标记
    b. IHC: 酶标（HRP/AP）/ 生物素标记
    c. IF/ICC: 生物素标记 / 荧光标记
    d. FC: 生物素标记 / 荧光标记

  • 抗体名称后括号中的 ”YA***” 代表什么？

    抗体名称括号中 ”YA***” 代表抗体的克隆号。克隆号主要用于区分不同的单克隆抗体。只有克隆号一致的抗体，其抗原表位才是完全相同的。

  • 不同抗体的浓度为什么不一致？抗体的浓度不满足我的实验需求怎么办？

    不同抗体的效价不同。MCE抗体是根据反应效果而非浓度配制的，目的是确保您的实验获得最佳效果。因此，我们可以确保抗体在网站或说明书中所述的应用和种属中，用我们推荐的稀释比例可以工作。

  • 直标抗体和非直标抗体该怎么选择？

    直标抗体是直接在特异性一抗上偶联了不同的标记物，比如HRP，FITC等，避免了二抗可能带来的非特异，因此特异性更高。另外，直标抗体可以省略二抗孵育步骤，从而缩短实验时间，使用更加方便。
    非直标抗体需要结合二抗使用。由于一抗和二抗反应中，一个一抗分子可以结合多个标记二抗，因此非直标抗体具有更高的灵敏度，适合用于检测表达量较低的蛋白抗原。同时，非直标抗体的使用成本更低、搭配灵活性更高，因此在需要多种标记组合时更具优势。
    直标抗体和非直标抗体各有优缺点，选择时应根据实验需求、成本等因素进行综合考虑。

  • 如何判断抗体是多抗还是单抗？如何选择？

    抗体产品详情页中的“克隆性”详细描述了抗体种类，可以按照实验需求进行选择。
    “Monoclonal’为单克隆抗体，是针对某一特定抗原表位产生高度均一的抗体，具有极强的特异性。
    “Polyclonal”为多克隆抗体，其特点是灵敏度高。多抗识别多个抗原表位，即使是有少数几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变，实验的结果也不会受到影响。
    “Recombinant”为重组抗体。重组抗体的生产过程高度可控、稳定，使得抗体的批次间的一致性好，重复性好，能够避免杂交瘤细胞制备中的一些问题，如基因丢失、基因突变和细胞株漂移等。

  • 抗体说明书上未标明我想要使用的应用和反应种属，我能够使用该抗体吗？

    未列出的应用和种属是该产品不适用或者未经检测的，一般不建议使用。若您想在其它物种、应用中使用这个抗体产品，您可以通过邮件或者电话联系技术支持，获得更多抗体信息，为您的研究工作提供更多的帮助。

  • 做WB实验时，为什么分子量与预期不符？

    可能原因 生物学原理 条带变化 解决方案
    翻译后修饰 磷酸化、糖基化、泛素化等共价键结合 变大 ① 查阅数据库或文献是否存在翻译后修饰
    ② 用合适试剂（如去除糖基化PNGase F）处理后条带可能消失
    形成多聚体 倍数增加的条带，可能形成了多聚体 变大 ① 需延长煮样时间
    ② 多次跨膜蛋白可尝试不煮样或使用较温和煮样方式
    相对电荷 受目标蛋白氨基酸组成影响 变大或变小 查询数据库或文献是否影响条带迁移
    异构体或剪切体 靶标蛋白可能有多个异构体或剪切体 变大或变小 查阅文献以及查看免疫原序列，判断抗体是否识别异构体或剪切体
    SDS-PAGE分离胶浓度不合适 分离胶浓度不合适引起的分子量偏差 变大或变小 调整胶浓度，分子量大的蛋白用低浓度分离胶，分子量小用高浓度分离胶
    蛋白降解 蛋白降解会导致分子量降低或出现多条带 变小 使用新鲜样本，加入蛋白酶抑制剂

  • 做WB实验时，没有目的条带怎么办？

    可能原因 生物学原理 内参条带 解决方案
    上样量不足 蛋白浓度过低导致观察不到条带 无 用BCA/Bradford测定浓度，每泳道加载20-50 µg
    蛋白未有效转移到膜 PVDF膜本身是疏水的，需要用甲醇激活增加亲水性 无 转膜前用甲醇激活PVDF膜
    裁膜范围不对 有些蛋白存在翻译后修饰和二聚体，裁膜范围不合适会导致观察不到条带 有 ① 在数据库中调研一下蛋白的修饰情况
    ② 参考文献中相同实验条件下蛋白可能出现的位置，扩大裁膜范围
    蛋白表达量低 目的蛋白在细胞、组织中表达量过低 有 ① 参考文献中造模方式，提高目的基因表达
    ② qPCR检测mRNA表达，看是否有变化趋势

  • 做WB实验时，为什么会出现多个条带？

    可能原因 生物学原理 解决方案
    靶蛋白特殊性 靶点存在异构体；具有多种修饰形式；存在剪接体/二聚体、多聚体 ① 实验前，通过查阅数据库或文献调研靶蛋白信息
    ② 存在多聚体，可以在上样前煮沸 10 min
    样本不合适 细胞系传代次数过多，蛋白表达谱发生变化；蛋白降解 ① 使用传代次数少的细胞株做对照
    ② 加入足量的蛋白酶抑制剂或使用新鲜样本
    封闭 封闭不充分 重新配置封闭液，如5%脱脂奶粉/BSA，延长封闭时间
    抗体孵育 一抗/二抗浓度过高；抗体不特异，非特异条带 ① 降低抗体浓度和/或孵育时间
    ② 更换抗体，或使用5%脱脂奶粉/BSA作为抗体稀释液

一站式药筛 相关 FAQ

  • 药物筛选有哪些常用的方法？

    常用的药物筛选方法主要有虚拟筛选、AI筛选和高通量筛选等。其中虚拟筛选和AI筛选借助计算软件和大型数据库即可完成，而高通量筛选则需要针对性构建合适的湿实验方法，利用实体化合物库和高通量设备来进行筛选。基于时间成本和经济成本的双重考量，如今的药物筛选常常通过虚拟筛选结合实验验证的方法来进行，快速、经济且有效。

  • 已有明确靶点，可以采用什么方法进行筛选？

    如果有明确靶点，且靶蛋白有已知的解析结构或者可通过Alphafold预测结构，调研得到合适的结合口袋之后，可利用虚拟筛选进行高至百万级的化合物初步筛选。根据化合物与靶蛋白的对接得分，挑选合适的分子进行后续的验证。
    如果有明确靶点，但是靶蛋白不适合进行虚拟筛选，也可以直接采用高通量的筛选方法。如基于化合物与靶蛋白亲和力的DEL筛选和SPR筛选，基于靶点功能的离子通道药物筛选、GPCR药物筛选、激酶靶点筛选、核受体药物筛选等。

  • 虚拟筛选得到的化合物如何进行验证？

    虚拟筛选之后的验证一般包括亲和力验证以及活性验证，其中亲和力验证一般采用亲和质谱、SPR、MST等方法，而活性验证则需要根据靶点特性设计针对性的实验方案，如针对酶学靶点可以利用酶活检测来验证化合物的活性。

  • 没有确定靶点可以进行药物筛选吗？

    如果没有明确靶点，也可以进行基于细胞表型的高通量筛选，如通过检测药物对肿瘤细胞增殖能力的影响来筛选抗肿瘤药物。

  • MCE可以提供哪些筛选方法？

    MCE可以提供多种筛选方法，如虚拟筛选、AI筛选、DEL筛选、SPR、亲和质谱、离子通道药物筛选、GPCR药物筛选、酶学靶点筛选、基于细胞表型的药物筛选等，并且可以提供分子动力学模拟、分子互作检测、蛋白晶体结构解析、药物找靶等上下游检测服务，为您的药物筛选提供一站式服务。（详见一站式药筛平台）

  • MCE药物筛选服务流程？

    a.客户咨询：客户提出项目需求和实验目的，并提供相关样品信息。
    b.项目评估：技术人员进行可行性评估，并由平台核算成本及周期，回复客户。双方针对项目细节进行协商。
    c.签订合同：确定方案后签订技术服务合同。
    d.项目实施：客户方支付项目预付款，我方安排项目启动。
    e.项目完成：我方发送电子版项目报告，客户验收无误后支付尾款。
    f.后续服务：技术人员对客户疑问进行解答，做好后续服务。

PROTAC 相关 FAQ

  • 1. MCE 可以提供 PROTAC 合成服务吗？

    MCE 能够提供 PROTAC 相关产品 (Ligand for E3 Ligase、PROTAC Linker、Ligand for Target Protein for PROTAC、E3 Ligase Ligand-Linker Conjugate、Target Protein Ligand-Linker Conjugate、PROTAC、SNIPER、PROTAC-Linker Conjugate for PAC) 的设计、合成、分析、纯化、优化、检测和评估等一站式服务。

  • 2. 在PROTAC 设计之前我们需要给 MCE 提供什么信息？

    需要告知我们靶蛋白，靶蛋白配体（如有），对 linker 及 E3 泛素连接酶配体是否有要求。

  • 3. 你们设计合成的 PROTAC 分子可以达到什么降解率？

    我们不保证合成的 PROTAC 分子的活性大小，但会提供合成的 PROTAC 分子详细的检测报告，如 HPLC、MS、NMR 等，确保产品高纯度和结构正确。

  • 4. PROTAC 定制合成的费用是多少？

    PROTAC 定制合成价格取决于产品结构及合成的量。
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