OptiLNP RNA Transfection Reagent 

OptiLNP RNA 转染试剂

脂质纳米粒 (Lipid Nanoparticles, LNP) 是一种以脂质为基础构建的纳米级药物递送系统，广泛应用于核酸（如 mRNA、siRNA、DNA 等）和小分子药物的递送。

裸露的 RNA 是一种带负电荷的亲水性大分子，由于细胞膜的的静电排斥作用，RNA 难以进入细胞，且容易被 RNA 酶迅速降解。通过利用 LNP 包封 RNA，可以使 RNA 通过细胞膜并在细胞质中释放，实现高效递送。

MCE OptiLNP RNA 转染试剂是一种基于脂质纳米粒 (LNP) 技术开发的即用型转染试剂，利用 LNP 特有的跨膜转运及逃逸机制可实现 RNA 的高效递送，适用于不同类型的 RNA 在常规细胞中的转染。

MCE OptiLNP RNA 转染试剂具有如下优点

1. 脂质纳米粒 (LNP) 技术：采用 LNP 载体，有效保护 RNA 免受递送过程中的降解和免疫系统清除的影响；

2. 高效的细胞内递送：LNP 特有的跨膜转运及逃逸机制，微量样品的包封率超过 80%，可实现 RNA 对常规细胞的高效转染；

3. 适用范围广：适用于常规细胞 RNA 的体外转染，支持多种 RNA 类型，如 siRNA、miRNA、gRNA、mRNA、saRNA 以及 circRNA 等；

4. 操作简便：无需包封设备，仅需一步混合即可完成 RNA-LNP 包封并进行转染，且转染后无需更换新鲜培养基；

5. 生物相容性好：细胞毒性低，能较好平衡高转染效率与细胞活力，作用温和；

6. 安全：配方不含乙醇，采用可降解脂质材料，确保安全性。

4℃，1 年

禁止冻结

以 24 孔板为例，其它培养孔板细胞量根据常规实验设计即可。

1) 贴壁细胞：转染前一天，将消化后的细胞按照 0.1 - 1 × 10⁵ 个细胞/孔铺板，使其在转染时密度为 30% - 40%。

2) 悬浮细胞：转染当天，配制转染试剂-核酸复合物之前，先进行细胞铺板，每 500 μL 生长培养基中加入 0.5 - 2.5 × 10⁵ 个细胞。

注：为提高转染效率，建议使用生长状态良好且生长处于指数期、存活率大于 90% 的细胞进行转染。

1. 制备 mRNA 预混液：用稀释缓冲液将 mRNA 原液进行稀释。mRNA 浓度 40 ng/μL 或 siRNA 浓度 3 pmol/μL。

2. 制备 RNA-LNP 复合物：（以下两种用量选一即可）：

a. 不稀释转染试剂：参考表 1、2。直接取等体积转染试剂与 RNA 预混液混合，用移液枪吹打 20 次以上使其充分混匀。

b. 稀释转染试剂：参考表 3、4。用稀释缓冲液将转染试剂稀释 2 倍制备转染试剂预混液，与 RNA 预混液等体积混合，用移液枪吹打 20 次以上使其充分混匀。

将 RNA-LNP 复合物加入细胞中，轻柔混匀，置于培养箱中继续培养。

转染细胞培养 24 - 48 h 后，可使用荧光检测法、Western Blot、ELISA、流式细胞术、报告基因等检测转染效果，或进行后续功能实验。

1. 本品经过 0.22 μm 滤膜过滤。

2. 为了获得较高的转染效率，RNA 原液建议使用无酶灭菌水，其他类型的溶剂对转染效率可能会有影响。

3. 建议 RNA 浓度：mRNA > 200 ng/μL，短链 RNA > 100 ng/μL，siRNA > 10 μM。

4. 建议制备 RNA 预混液使用试剂盒配套的稀释缓冲液稀释 RNA 原液。

5. 建议 RNA 预混液浓度为 40 ng/μL，终浓度为 20 ng/μL。如果涉及多种 RNA 共转染，则 RNA 预混液浓度为各种 RNA 浓度之和，同时建议选择稀释转染试剂的方案进行细胞转染。如：CRISPR Cas9 mRNA 与 gRNA 共转染，RNA 预混液浓度为 Cas9 mRNA 浓度 + gRNA 浓度，Cas9 mRNA (μg) 与 gRNA (μg) 的推荐用量比为1:1 - 1:2。

6. 常见的短链 RNA （如 siRNA）若无特殊修饰，通常 1 nmol 的质量在 13 - 15 μg 之间，准确质量可结合具体核酸序列及修饰情况进行计算。

7. RNA/LNP 比例是 LNP 包封的关键，如需调整转染每孔 RNA 用量，可按比例调整加入细胞的每孔 RNA-LNP 复合物的体积。

8. RNA-LNP 复合物室温可稳定保存 8 h，请勿将 RNA-LNP 复合物置于冷冻条件。

9. 转染前后无需更换培养基，含血清、双抗的完全培养基对转染效果无明显影响。

10. 转染后 6 h 可按细胞常规培养流程进行换液或其他操作。

11. 细胞状态会极大影响转染效率，建议使用生长状态良好的细胞进行转染。

12. 影响转染效率的因素有很多，如细胞类型、细胞状态及密度、核酸质量及浓度、转染试剂与核酸比例等，建议先做预实验摸索最佳转染条件。

13. 为避免 RNA 酶污染，整个实验过程使用无 RNA 酶和无热原性的材料，如离心管、枪头等。

14. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

15. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。