2. MCE Kits
  3. Cell Biology
  4. Cell Analysis
  5. Cell Proliferation and Cytotoxicity
  6. Cell Counting Kit-8

Cell Counting Kit-8 

Cell Counting Kit-8

Cat. No.: HY-K0301
Manual SDS 技术支持

Cell Counting Kit-8，简称CCK-8试剂盒或CCK8试剂盒，是一种基于WST-8而广泛应用于细胞活性和细胞毒性检测的快速、高灵敏度试剂盒。

Cell Counting Kit-8

1.  客户无需承担相应的运输费用。

2.  同一机构（单位）同一产品试用装仅限申领一次，同一机构（单位）一年内

     可免费申领三个不同产品的试用装。

3.  试用装只面向终端客户。

规格 价格 是否有货 数量
Free Sample (1 mL)   Apply now  
1 mL ￥210 In-stock
5 mL ￥680 In-stock
30 mL ￥2400 In-stock
120 mL ￥7680 In-stock

* Please select Quantity before adding items.

MCE 顾客使用本产品发表的 2679 篇科研文献

Proliferation Assay
Cell Viability Assay

    purchased from MCE. Usage Cited in: Cell Death Dis. 2018 Feb 7;9(2):177.  [Abstract]

    CCK8 assay. Proliferation of CAR T cells during expansion in response to repetitive stimulation with EGFR antigen.

    purchased from MCE. Usage Cited in: Oncol Lett. 2018 Apr;15(4):4129-4136.  [Abstract]

    The effect of TRPM8 knockdown on (A) LNCaP and (B) PC3 cells proliferation is measured by CCK 8 assay.

    purchased from MCE. Usage Cited in: J Mol Liq. 2023 Mar 2.

    CCK-8 (10 μM; 24 h) is used to detect the survival rate of L929 cells after treatment with different concentrations of DESs.

    purchased from MCE. Usage Cited in: Signal Transduct Target Ther. 2024 Mar 8;9(1):63.  [Abstract]

    CCK8 (1-2 h) assay-based detection of IC50 of gemcitabine in ICC cells.

    purchased from MCE. Usage Cited in: J Nanobiotechnology. 2022 Jul 14;20(1):324.  [Abstract]

    CCK-8 (10 μM; 1-2 h) assay was used to assess the effect of huc-MSCs-derived exosomes (1, 10, 50, 100 µg/ml) on BV2 cell viability, and ns indicates no significance.

    • CCK-8实验原理

    • CCK-8优势

    • CCK-8实验步骤

    • 储存方式

    • 实验注意事项

    • 文件

    CCK-8实验原理

    Cell Counting Kit-8，简称 CCK-8 试剂盒，是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。 CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的 formazan。



    WST-8 和 WST-8 formazan 的结构式


    细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数目呈线性关系。



    CCK-8 的原理图
    CCK-8优势

    WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品，和 MTT 或其它 MTT 类似产品，如 XTT、MTS 等相比有明显的优点。第一，MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原 生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶剂来溶解；而 WST-8 和 XTT 、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。第二，WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。第三，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更可靠。第四，WST-8 和 MTT、XTT 等相比线性范围更宽，灵敏度更高，并且更加稳定。WST-8 对细胞无明显毒性。加入 CCK-8 溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，检测时间更加灵活，便于确定最佳测定时间。
    CCK-8实验步骤

    试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
    1. 制作标准曲线
    a. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞；
    b. 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 5-7 个细胞浓度梯度，每组 4-6 个复孔；
    c. 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁，然后每 100 μL 培养基加 10 μL CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD 值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致。

    2. 细胞活性检测
    a. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时；
    b. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡) ；
    c. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时；
    d. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

    3. 细胞增殖-毒性检测
    a. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时；
    b. 向培养板加入不同浓度的待测药物；
    c. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间；
    d. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡) ；
    e. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时；
    f. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

    4. 计算公式
    细胞存活率 =[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%
    抑制率 =[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%
    As: 实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液) ；
    Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液，不含药物) ；
    Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液，不含细胞、药物) 。

    CCK-8 试剂盒检测细胞活性


    注：如果待测药物有氧化性或还原性，可在加入 CCK-8 之前更换新鲜培养基，去掉待测药物的影响。当待测药物影响比较小的情况下可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。
    储存方式
    4°C，2年 长期保存，建议避光
    实验注意事项

    1. CCK-8 的培养时间一般为 1-4 小时，但在培养 30 分钟左右即可取出肉眼观察显色程度，根据细胞种类而定，需要摸索条件，CCK-8 的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。
    2. 使用 96 孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的 PBS 、水或培养液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
    3. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂 (例如一些抗氧化剂) 会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
    4. 加入药物中如含有金属，对 CCK-8 显色有影响。终浓度为 1 mM 的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5% 、15% 、90% 的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是 10 mM 的话，将会 100% 抑制。
    5. 培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
    6. 本产品可以检测，但不能检测酵母细胞。向 100 μL 培养液中加入 10 μL CCK-8 溶液，并培养 1-4 小时或过夜。
    7. CCK-8 试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深，OD 值不断增加 (注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的) 。
    8. 要测定细胞的具体数量，建议同时做标准曲线。
    9. 建议采用多通道移液器，以减小平行孔间的差异。
    10. 以下方法可以终止 CCK-8 反应 (96 孔板) ：
    (a). 在显色反应后，将培养板放置 4°C 冰箱内。(b). 每孔加 10 μL 0.1 M HCl 溶液。(c). 每孔加 10 μL 1% (w/v) 的 SDS (十二烷基硫酸钠) 溶液。
    注意：反应停止后，应在 24 小时内测定。
    11. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
    12. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
    包装
    Cat. No. Product Name Package
    HY-K0301-1 mL Cell Counting Kit-8 1 mL
    HY-K0301-5mL Cell Counting Kit-8 5 mL
    HY-K0301-30 mL Cell Counting Kit-8 5 mL × 6
    HY-K0301-120 mL Cell Counting Kit-8 5 mL × 24
    文件资料
    Help & FAQs
    • Do most proteins show cross-species activity?

      Species cross-reactivity must be investigated individually for each product. Many human cytokines will produce a nice response in mouse cell lines, and many mouse proteins will show activity on human cells. Other proteins may have a lower specific activity when used in the opposite species.

    您最近查看的产品:

    Your information is safe with us. * Required Fields.

       产品名称：

    		  

    * 需求量：

    * 客户姓名：

    		 

    * Email：

    * 电话：

    		 

    * 公司或机构名称：

       留言给我们：

    Bulk Inquiry

    Inquiry Information

    产品名称：
    Cell Counting Kit-8
    目录号：
    HY-K0301
    需求量：
    嗨！很高兴为您提供帮助！

    尊敬的 MCE 客户您好，
    请您选择所在区域，我们将转接对应客服为您服务！

    热门区域

    A

    B

    C

    F

    G

    H

    J

    L

    N

    Q

    S

    T

    X

    Y

    Z

    热 A B C F G H J L N Q S T X Y Z